北京地區(qū)犬瘟熱、犬細(xì)小病毒感染及犬冠狀病毒病的分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、2007年12月-2008年5月對北京地區(qū)的犬病流行情況進(jìn)行了調(diào)查，共調(diào)查犬404只，其中患犬瘟熱41只，細(xì)小病毒性腸炎115只，犬冠狀病毒病86只，主要以細(xì)小病毒性腸炎多發(fā)。本次調(diào)查疾病的樣品陽性檢出率與病犬的免疫預(yù)防有一定的關(guān)系，定期免疫的犬發(fā)病少，未免疫的犬樣品陽性檢出率高，說明未免疫的犬易感染犬瘟熱等病，定期免疫可提高機(jī)體免疫力。本試驗分析了犬病流行病學(xué)的特點，并提出了今后的防治措施和意見。
　　 根據(jù)發(fā)表的犬瘟熱病毒（

2、CDV）參考毒株Onderstepoort的序列設(shè)計了一對引物，以感染犬瘟熱病毒的犬的糞便總RNA為模板，RT-PCR擴(kuò)增出17株CDV的H全基因1877 bp的片段，將這個片段連接到pGEM-Teasy載體上，經(jīng)酶切鑒定得到陽性克隆，將陽性質(zhì)粒進(jìn)行序列測定，并與國內(nèi)外毒株進(jìn)行同源性比較和系統(tǒng)發(fā)育分析，結(jié)果顯示17株均為Asia-1型。北京地區(qū)2008年流行的毒株主要是Asia-1型。
　　 本試驗研究了CPV VP2297位點

3、（Ser變?yōu)锳la）的變異情況。根據(jù)VP2位點297的改變引起限制性內(nèi)切酶AluI酶切位點的變化，建立PCR依賴性限制性片段長度多態(tài)性分析（PCR-RFLP）方法，檢測VP2297位點的變異。通過基因進(jìn)化樹的分析表明，國內(nèi)外的CPV起源于共同的祖先。同時根據(jù)GenBank中CPV-d株（M23255）VP2的基因序列和CPV-2、CPV-2a，與CPV-2b的氨基酸位點差異，建立區(qū)分CPV-2、CPV-2a與CPV-2b的等位基因特異P

4、CR，應(yīng)用型特異性PCR將CPV-2與CPV-2a，及CPV-2b區(qū)分開來，應(yīng)用檢測點突變的等位基因特異PCR，將CPV-2a與CPV-2b區(qū)分開來。在隨機(jī)抽取的40個CPV陽性樣品中，CPV-2、CPV-2a、CPV-2b分別占抽取樣品總數(shù)的5％、77.5％和17.5％。目前CPV-2a與CPV-2b共同存在于犬群中。
　　 本試驗采用Pratelli等建立的套式PCR.方法，對采集自北京地區(qū)的犬糞便樣品進(jìn)行CCV檢測和基因型