鵝細(xì)小病毒安徽株的分離鑒定與組織分布.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩50頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、小鵝瘟是以雛鵝和雛番鴨作為侵染對(duì)象,以壞死性腸炎為主要病變的高度致死性傳染病,是危害中國(guó)養(yǎng)鵝業(yè)發(fā)展的最嚴(yán)重傳染病之一。該病毒主要侵害10日齡以下的雛鵝,也偶有60日齡的鵝發(fā)病,發(fā)病率高達(dá)80%,致死率可達(dá)60%。因此,探討小鵝瘟病的流行規(guī)律、病毒在鵝體內(nèi)的復(fù)制及組織分布情況,對(duì)研究小鵝瘟的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。
  研究分別從安徽兩個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)病死亡的、具有小鵝瘟典型病變的病鵝肝臟病料中各分離獲得1株病毒,經(jīng)過電鏡觀察、PCR反應(yīng)、

2、全基因組序列分析鑒定后,證實(shí)分離株為鵝細(xì)小病毒(Gosling plague virus,GPV),并分別命名為GPV YZ株和GPV WX株。通過將GPV YZ株和GPV WX株人工感染鵝胚發(fā)現(xiàn),該兩株病毒均可引起鵝胚全身實(shí)質(zhì)性器官出血,部分鵝胚頭部皮下水腫。鵝胚致病性試驗(yàn)結(jié)果表明GPV YZ株的ELD50=10-4.840.2ml,GPV WX株的ELD50=10-5.160.2ml,兩株毒株的毒力相當(dāng)。設(shè)計(jì)5對(duì)引物進(jìn)行全基因擴(kuò)增,

3、測(cè)序結(jié)果表明YZ株和WX株全基因序列長(zhǎng)度均為5049bp,VP3片段長(zhǎng)度均為1605bp,兩毒株的全基因序列與VP3片段的核苷酸序列同源性分別為99.7%和99.4%。進(jìn)化樹分析表明此兩毒株與周邊省市分離的GPV毒株如江蘇GPV YZ99-6和LH株、上海GPV SHFX-1201株以及安徽GPV Y株等親緣關(guān)系較近;與標(biāo)準(zhǔn)毒株B株比較發(fā)現(xiàn),YZ株和WX株均在67-80nt(CACATGCTTCCGGT)處、334-347nt(GCAT

4、GTGACCGGAA)處、4767-4780nt(CACATGCTTCCGGT)處、5033nt-5046nt(GCATGTGACCGGAA)處各缺少14個(gè)堿基,缺失部分均在ITR區(qū),但并未影響病毒發(fā)夾結(jié)構(gòu)的生成。
  為探索GPV在雛鵝體內(nèi)的增殖規(guī)律,研究選取GPV YZ株作為抗原建立GPV人工感染動(dòng)物模型;利用VP3片段設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物,建立了SYBR Green I熒光定量PCR的檢測(cè)方法。通過構(gòu)建質(zhì)粒作為模板標(biāo)準(zhǔn)品繪制

5、出熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線,相關(guān)系數(shù)R2≥0.99表明Ct值與拷貝數(shù)對(duì)數(shù)之間呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系,并得出函數(shù)公式:Y=-4.787X+35.44。應(yīng)用SYBR Green I熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)人工感染雛鵝各臟器在不同時(shí)間段的病毒含量。結(jié)果,48h以前病毒含量普遍較低,48h-96h病毒大量增殖,96h各臟器的病毒含量普遍達(dá)到最高水平,144h病毒含量下降,但比72h病毒含量高。因此得出GPV在雛鵝體內(nèi)增殖情況的數(shù)學(xué)模型是以96h為中軸的正態(tài)分布

6、曲線。以96h為例,各臟器的病毒含量為:腎臟>回腸>十二指腸>脾臟>空腸>肝臟>心臟>大腦。
  為揭示GPV的抗原定位和引起的組織學(xué)變化,研究以人工感染雛鵝96h時(shí)的各臟器作為檢測(cè)對(duì)象,通過免疫組化和HE染色技術(shù)進(jìn)行檢測(cè),HE染色結(jié)果顯示GPV引起小腸絨毛脫落、腎小管上皮細(xì)胞腫脹、肝臟出血等,免疫組化結(jié)果顯示病毒抗原定位于小腸絨毛上皮細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞、大腦神經(jīng)細(xì)胞的胞漿中,其中小腸、腎臟所檢測(cè)到的陽(yáng)性信號(hào)比肝臟等實(shí)質(zhì)性臟器的

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論