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1、揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文犬細(xì)小病毒VP2基因的分子生物學(xué)特性的研究姓名:楊玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師:劉秀梵張如寬20020401AbstractApairofprimersweredesignedandsynthesizedbasedonVP2geneofCPVfromGenebankThegenomicDNAsamplesofcanineparvovirusstrainisolatedinYangzl30uwereex
2、tractedandusedaStemplatesforpolymerasechainreaction(PCR)toamplifytheVP2geneThespecific1740bpbandWaSamplifedandclonedintopUCl8vectorattherestrictionendonucleaseEcoRIandSalIsitesTherecombinantpalsmidswereidentifiedbyrestri
3、ctionendonueleaseanalysisTheexogenousinsertofrecombinantplasmidWaSfurtherconfirmedbysequenceanalysisAftersequencing,VV2geneofYangzhouisolationWascomparedwiththatofAmericanreferencestrainsCPVd(type2),CPV15(type2a),CPV39(t
4、ype2b)Theresultsshowed995%,997%997%homologyamongthesedifferentstrainsVP2fragmentsfiromCPVYangzhoustrainwereamplifiedwithanothertwopairsofprimersPCRfragmentswereclonedtothedownstreamofGSTgeneaccordingtothefightOpenReading
5、FrameinpGEX6p1vectorAfterinducingwith10mMIPTGand37。CtheinsertswereexpressedastwofusionproteinscontainingtheGSTproteinAccordingtoSDSPAGEanalysistwoGSTVP2fusionproteinswerefoundas54kDand61kDbandsrespectivelyTheexpressedpro
6、ductsⅥ啪extractedfromthegelandadded髂immunogentoimmunizemiceintrapedtoneally5doseswithone—weekintervalsThespecificityofantibodyw觴detectedpositivelyagainstCPV—infectedFK81cellintheindirectinamunofluorescentassay(IFA)Theresu
7、ltsofthestudyshowedthattheinvitroexpressedproductsofVP2genemaintainedthenaiveantigenicityofCPVThesequenceanalysisofVP2genewillcontributetothestudyofantigenicdrift,andthefusionproteinswillbeusefulforthegenerationofspecifi
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