膠體金免疫層析技術(shù)檢測犬細小病毒抗體方法的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文運用膠體金免疫層析技術(shù),建立一種快速、靈敏、特異的檢測犬細小病毒抗體的方法。 采用對犬細小病毒敏感的F81細胞系從疑似犬細小病毒感染犬的糞便中分離病毒,并免疫犬獲得犬細小病毒陽性血清;采集健康犬的血清,采用硫酸銨鹽析和葡聚糖G.200柱層析法純化獲得犬的IgG,十二烷基硫酸鈉.聚丙烯酰胺凝膠電泳(sDS-PAGE)檢測其達較高純度;以制備的犬IgG純品常規(guī)免疫健康家兔,雙向瓊脂擴散試驗檢測抗體效價達1:64以上后收集兔血清,

2、辛酸-硫酸銨鹽析法提純兔IgG,聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測其達較高純度。檸檬酸三鈉還原法制備直徑20nm的膠體金顆粒,膠體金標記兔抗犬IgG,最佳標記量和最適pH值的測定結(jié)果分別為1μg/ml和9.0,低溫超速離心法純化標記好的金標二抗;純化后的膠體金標記抗體作1:2稀釋,吸附于玻璃纖維。犬細小病毒抗原在硝酸纖維素膜上劃線作為檢測線,最適劃線濃度為0.8mg/ml;羊抗兔IgG在硝酸纖維素膜上劃線作為對照線,最適劃線濃度為0.75mg/ml

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