豬肉中氟苯尼考的膠體金免疫層析檢測(cè)方法的建立.pdf

1、近年來(lái)，我國(guó)畜產(chǎn)品的獸藥殘留問(wèn)題時(shí)有爆發(fā)，如“瘦肉精”事件、“多寶魚(yú)”事件等，大家對(duì)畜產(chǎn)品的安全問(wèn)題也越來(lái)越關(guān)注。根據(jù)2015年公布的《中國(guó)首份抗生素的全國(guó)使用量與排放量清單》顯示，2013年我國(guó)共使用了16.2萬(wàn)噸抗生素，其中52％的抗生素使用在畜禽養(yǎng)殖過(guò)程中，在36種常見(jiàn)抗生素中，獸用抗生素的比例高達(dá)84.3%。
　　氟苯尼考作為一種廣譜抗菌、吸收好的抗生素被大量運(yùn)用于畜產(chǎn)品的養(yǎng)殖過(guò)程中。具有血液毒性、胚胎毒性以及免疫抑制作用

2、，大量食用氟苯尼考超標(biāo)的豬肉會(huì)對(duì)人體健康帶來(lái)極大的危害。同時(shí)，氟苯尼考的濫用也會(huì)造成細(xì)菌的抗藥性加強(qiáng)，對(duì)環(huán)境和我國(guó)經(jīng)濟(jì)發(fā)展帶來(lái)不利影響。本課題旨在建立一種快速、定量的檢測(cè)方法檢測(cè)豬肉中氟苯尼考?xì)埩簟?br>　　本研究對(duì)江西省南昌市、九江市、撫州市、宜春市和上饒市等5個(gè)地區(qū)的部分豬肌肉和豬肝樣品進(jìn)行了初步篩查。結(jié)果顯示檢測(cè)樣本的抗生素殘留情況總體控制較好，但是氟苯尼考和恩諾沙星等抗生素檢出率較高。
　　本實(shí)驗(yàn)采用戊二醛法和碳化二亞胺

3、法將FFA偶聯(lián)在載體蛋白牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白(OVA)上制備免疫抗原和包被抗原，并對(duì)制備的全抗原采用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行表征。分別采用制備的免疫抗原和購(gòu)買的氟苯尼考全抗原免疫小鼠。最終，多克隆抗體的效價(jià)為1：32000。
　　本文通過(guò)篩選抗原和抗體，優(yōu)化抗體標(biāo)記的pH、抗體的標(biāo)記量、金標(biāo)抗體的使用量、T線和C線的濃度以及最佳檢測(cè)時(shí)間，建立了一種豬肉中氟苯尼考的膠體金免疫層析試紙條的檢測(cè)方法。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，得出的最優(yōu)工藝條

4、件為：抗體標(biāo)記pH值為8.0，抗體標(biāo)記量為6μg/mL，金標(biāo)抗體用量為5μL，T線濃度為1.0 mg/mL，C線濃度為0.3 mg/mL，檢測(cè)時(shí)間為25 min。本方法的線性范圍為4~200μg/L，最低檢測(cè)限為2.18μg/L，IC50值為9.795μg/L。批內(nèi)加標(biāo)回收率在99~113%之間，CV值為10.1~15.6；批間加標(biāo)回收率在98.4~118.3%，CV值為14.3~17.2%。與商業(yè)化的ELISA試劑盒呈良好的相關(guān)性（R