D-二聚體膠體金免疫層析法定量檢測方法的建立.pdf

1、背景：
　　D-二聚體(D-Dimer,D-D)是交聯(lián)纖維蛋白（Fb）經(jīng)纖溶酶作用后的特異降解產(chǎn)物，可作為體內(nèi)高凝狀態(tài)和纖溶亢進(jìn)的分子標(biāo)志物,是唯一反映凝血和纖溶的理想指標(biāo)。當(dāng)患有血栓性及肺栓塞性疾病、彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）、心腦血管疾病、肝臟疾病及腫瘤性疾病時，體內(nèi) D-二聚體含量會明顯升高，尤其在肺栓塞和深靜脈血栓的排除診斷中，D-二聚體的含量具有極其重要的臨床排除診斷價值。此外，D-二聚體的升高與急性胰腺炎、糖尿病血管性

2、病變及急慢性蕁麻疹等疾病的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后有極其密切的聯(lián)系。因此，檢測樣本血漿中 D-二聚體的含量對于多種疾病的輔助診斷和預(yù)后監(jiān)測具有極其重要的臨床意義。
　　目前，檢測D-二聚體的方法主要有乳膠凝集法、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、免疫比濁法和膠體金免疫層析法，目前臨床上應(yīng)用最多的是免疫比濁法。然而，免疫比濁法雖有定量準(zhǔn)確、靈敏度高、試劑重復(fù)性好、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，但其需要大型儀器設(shè)備，從而限制了 D-二聚體檢測項目在基層醫(yī)院的普及

3、開展。這就使得在 D-二聚體的檢測中，急需要一種快速、簡便同時可定量的檢測方法以普及 D-二聚體的檢測，而膠體金免疫層析定量檢測技術(shù)正具有了上述優(yōu)點，進(jìn)而彌補(bǔ)了免疫比濁法的不足。近年來，隨著膠體金免疫層析技術(shù)的不斷發(fā)展和成熟，膠體金免疫層析技術(shù)也已從定性發(fā)展為既可定性又可定量，并越來越廣泛地應(yīng)用于多種物質(zhì)的檢測，也以其獨特的優(yōu)勢有望應(yīng)用于 D-二聚體的定量檢測中。
　　目的：
　　建立一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、精密性好、穩(wěn)定性

4、優(yōu)、線性范圍寬的D-二聚體膠體金免疫層析定量檢測方法，為 D-二聚體的檢測提供了一種新的技術(shù)和方法，為臨床輔助診斷相應(yīng)疾病提供更便捷的實用價值。
　　方法：
　　本課題應(yīng)用檸檬酸三鈉還原氯金酸法制備膠體金溶液，應(yīng)用尿激酶裂解纖維蛋白的方法制備室內(nèi)參考品，運用河南省生物工程技術(shù)研究中心金標(biāo)實驗技術(shù)和平臺對本課題多種實驗條件進(jìn)行了優(yōu)化和選擇，對試紙條的靈敏度、特異性、線性、精密性和穩(wěn)定性等方面進(jìn)行了評價，并將本課題建立的檢測方法

5、與美國IL公司的ACL-TOP700檢測系統(tǒng)（免疫比濁法）進(jìn)行了對比。
　　結(jié)果：
　　研究結(jié)果顯示，本課題制得的D-二聚體室內(nèi)參考品在-20℃條件下可以保存至少7個月，4℃條件下可以保存至少3個月，37℃條件下可以保存至少7天，達(dá)到了室內(nèi)質(zhì)控品的要求；本檢測方法的最低檢測限為0.15625ug/ml，線性范圍為0.15625-10ug/ml；與纖維蛋白原、甘油三酯及膽紅素均無交叉反應(yīng)性；批內(nèi)變異系數(shù)分別為3.78％和2.8

6、1%，批間變異系數(shù)分別為4.95%和4.07%；在4～25℃儲存條件下截止目前存放了12個月，37℃條件下放置144h，試紙條性能未見下降；用本課題建立的檢測方法與美國IL公司的ACL-TOP700檢測系統(tǒng)（免疫比濁法）對55份臨床樣本中的D-二聚體含量進(jìn)行測定，兩種結(jié)果相關(guān)系數(shù)R2=0.98593，回歸方程Y=0.95964X+0.02645，兩者相關(guān)性良好。
　　結(jié)論：
　?。?）制備出穩(wěn)定的D-二聚體室內(nèi)參考品，可成功