膠體金免疫層析方法快速檢測食品中氯霉素的殘留研究.pdf

1、目的：氯霉素作為一種高效廣譜的抗生素，廣泛用于動物各種傳染性疾病的治療，但是因其毒副作用較強，許多國家和地區(qū)相繼禁止或嚴格限制使用氯霉素，傳統(tǒng)的氯霉素殘留分析方法需要昂貴的儀器和專業(yè)技術(shù)人員，且周期長、成本高，不能滿足現(xiàn)場和快速檢測的要求。因此，建立高效、靈敏、經(jīng)濟的氯霉素殘留分析方法是很有必要的。膠體金免疫層析試紙條檢測法是利用抗原和抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)對微量抗原或抗體進行測定的方法，本論文旨在研制氯霉素免疫膠體金層析試紙條，應(yīng)用于畜

2、產(chǎn)品中氯霉素殘留的快速檢測，具有重要的現(xiàn)實意義和極高的商業(yè)開發(fā)價值。
　　 方法：通過體外擴大培養(yǎng)雜交瘤細胞，將細胞接種到小鼠體內(nèi)，采用體內(nèi)誘生法制備出含抗氯霉素特異性單克隆抗體的腹水。腹水經(jīng)辛酸-硫酸銨法、親和柱層析法進行純化。純化后用全抗原對三株單抗從蛋白濃度、效價以及交叉反應(yīng)等指標進行質(zhì)量鑒定；采用檸檬酸三鈉還原法制備了不同粒徑的膠體金，將具有氯霉素特異性的免疫膠體金均勻灌注在BT50型玻璃纖維膜，烘干后即為膠體金墊。經(jīng)比

3、較試驗選用Whatman公司的AE98Fast硝酸纖維素膜作為層析膜；控制線采用20倍稀釋的羊抗鼠IgG；用濃度為1mg/mL的氯霉素包被原(CAP-BSA)噴涂檢測線，最后組裝成試紙條。
　　 結(jié)果：選取4D10作為制備探針抗體，其蛋白濃度為2.89mg/mL，經(jīng)ELISA法測定抗體效價為1：1.024×106，利用改良競爭ELISA法測定單抗與各抗生素的交叉反應(yīng)，抗氯霉素單克隆抗體(CAP-McAb)與氯霉素琥珀酸鈉有交叉反

4、應(yīng)而與青霉素、鏈霉素、磺胺二甲嘧啶、甲砜霉素等抗生素?zé)o交叉反應(yīng)，與各抗生素、類似物的交叉率均小于0.01[％]，具有較高的特異性和親和力。通過紫外分析和外觀觀察試驗確定了膠體金標記抗體的最適蛋白質(zhì)濃度為48μg/mL，最適pH在8.2左右。用制得的免疫層析試紙條檢測已知的含有氯霉素的樣品，靈敏度為100ng/mL，在其靈敏度范圍內(nèi)重現(xiàn)性為100[％]，試紙條在5min左右出現(xiàn)清晰的條帶。
　　 結(jié)論：對制備的氯霉素的免疫膠體金層