膠體金免疫層析法對AFP、CEA和FN的快速檢測.pdf

1、20世紀80年代，納米科技在多學科交叉的基礎(chǔ)上發(fā)展成為一門新興學科，近年來，納米技術(shù)不斷向生命科學和醫(yī)學領(lǐng)域滲透，利用納米生物技術(shù)研究和解決其中的重大問題，推動納米生物及相關(guān)技術(shù)的發(fā)展，正成為當前一個重要的前沿理論，其中納米免疫技術(shù)在生命科學和醫(yī)學領(lǐng)域中的應用更是倍受關(guān)注。納米膠體金免疫層析方法(Gold immunochromatography assay，GICA)是20世紀90年代興起的一種將膠體金免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)相結(jié)合的固

2、相膜免疫分析方法。本文主要研究了膠體金免疫層析技術(shù)在檢測甲胎蛋白、癌胚抗原和纖維連接蛋白等腫瘤標志物方面的應用。 (1)采用經(jīng)典的Frens方法，用1％的檸檬酸三鈉溶液還原氯金酸溶液制備了20nm、40nm、70nm三種不同粒徑的膠體金，實驗結(jié)果表明20nm、40nm的膠體金比較適合做免疫層析實驗。所制備的20nm的膠體金，從其TEM圖上可以清楚的看到，膠體金顆粒具有均勻的粒徑和良好的分散性，其最大可見吸收波長在521nm，峰形

3、較窄，也說明粒徑比較均一。40nm的膠體金最大吸收波長在527nm。 (2)膠體金標記技術(shù)(Immunogold labeling technique)是以膠體金作為示蹤標記物，應用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術(shù)。利用膠體金在堿性環(huán)境中帶負電荷的性質(zhì)，在適當?shù)臈l件下可以與蛋白分子通過物理吸附作用發(fā)生牢固結(jié)合。本文用目測法，研究了膠體金標記甲胎蛋白、癌胚抗原和纖維連接蛋白的最佳pH和最佳標記蛋白量，實驗結(jié)果表明他們的最佳標記

4、pH均為9，最佳標記蛋白量分別為14.4ug·ml-1，14.4ug·ml-1，7.2ug·ml-1。 (3)抗原和抗體的結(jié)合實質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點之間，由于兩者在化學結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補關(guān)系，所以抗原—抗體反應具有高度的特異性，而抗原分子一般具有多個抗原決定簇，因此可以與多個抗體分子發(fā)生結(jié)合。本文應用雙抗體夾心法，將特異性的抗體先固定于硝酸纖維素膜上，免疫膠體金干燥在膠金墊上，然后將吸水紙、NC膜