白細(xì)胞介素-2基因表達(dá)質(zhì)粒對犬細(xì)小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增強(qiáng)作用.pdf

1、犬細(xì)小病毒病是由犬細(xì)小病毒(Canineparvovirus,CPV)引起的一種高度接觸性傳染病。犬細(xì)小病毒屬細(xì)小病毒科,細(xì)小病毒屬。該病毒于1978年首次發(fā)現(xiàn)。該病毒可引起幼犬嚴(yán)重的腸炎,引起新生犬心肌炎。人們研究證明犬細(xì)小病毒編碼的VP2蛋白是該病毒主要抗原蛋白。研究證實(shí)由VP2基因制備的DNA疫苗能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。
　　 為提高VP2DNA疫苗的免疫原性,本實(shí)驗(yàn)在小鼠體內(nèi)嘗試了利用犬白細(xì)胞介素2(clL-2)基

2、因增強(qiáng)VP2DNA疫苗免疫應(yīng)答的研究。通過RT-PCR方法從犬脾淋巴細(xì)胞中分別擴(kuò)增含終止密碼子和不含終止密碼子的cIL-2cDNA基因,然后將基因插入到真核表達(dá)載體pcDNA3.1中,分別構(gòu)建成非融合的和與Myc/His融合的cIL-2基因真核分泌型表達(dá)載體,pcDNA-cIL-2和pcDNA-cIL-2/MH。將pcDNA-cIL-2/MH表達(dá)載體通過磷酸鈣方法轉(zhuǎn)染HEK293FT細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá),以確定構(gòu)建的表達(dá)載體能否介導(dǎo)cIL-

3、2在真核細(xì)胞中進(jìn)行分泌表達(dá)。然后用VP2表達(dá)載體(pcDNA-CD5sp-VP2,本室構(gòu)建)單注射和VP2/IL-2表達(dá)載體共注射對小鼠進(jìn)行免疫(用pcDNA3.1載體作為陰性對照)。免疫后通過ELISA方法檢測免疫后不同時(shí)期小鼠血清VP2的抗體水平,并通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測免疫后小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng),用ELISA方法測定小鼠淋巴細(xì)胞γ干擾素的表達(dá)水平。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增的小鼠cIL-2基因與GenBank的參

4、考序列一致,構(gòu)建的cIL-2表達(dá)載體能夠介導(dǎo)重組cIL-2在HEK293FT細(xì)胞中進(jìn)行分泌表達(dá)。免疫結(jié)果顯示,利用cIL-2/VP2表達(dá)載體共免疫小鼠,免疫后35d血清中VP2的抗體水平達(dá)到1:5120,明顯高于VP2表達(dá)載體單免疫組(P＜0.01)。淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)表明,兩組免疫小鼠的淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)均明顯高于陰性對照組(P＜0.01),共免疫組的刺激指數(shù)又明顯高于單免疫組(P＜0.05)。共免疫小鼠淋巴細(xì)胞γ干擾素的表達(dá)水平明顯高于