固始雞重組白細胞介素-2作為免疫增強的研究.pdf

1、本研究通過原核系統(tǒng)表達了固始雞重組IL-2蛋白，經(jīng)過鎳親和層析柱純化后，分別與雞新城疫滅活苗和雞痢疾志賀氏菌滅活苗同時免疫雞群，以檢測其對疫苗的免疫增強效果。共分三個試驗。 試驗一將低溫保存的基因工程表達菌pET28a-GSIL-2/BL21(DE3)復(fù)蘇后，經(jīng)過IPTG誘導(dǎo)，表達了固始雞重組IL-2蛋白。SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示：目的蛋白分子量為18kD左右，薄層掃描分析表明表達量占菌體總蛋白的18％；經(jīng)超聲波裂解菌體，離

2、心初步分離，目的蛋白主要以包涵體形式存在，但在細胞裂解上清中也有一定含量。將包涵體經(jīng)過初步分離、變性、鎳親和層析柱純化、復(fù)性，并對純化的目的蛋白進行生物學(xué)活性檢測。MTT試驗結(jié)果表明：重組IL-2對經(jīng)ConA活化的雞脾淋巴細胞具有明顯的體外增殖作用，這表明重組IL-2具有一定免疫增強作用。 試驗二固始雞重組IL-2作為免疫增強劑對雞新城疫滅活苗免疫效果的影響。5日齡200只雞隨機分為5組，每組40只雞(公母各半)，即空白對照組，

3、新城疫疫苗組，新城疫疫苗+IL-2(10ug)組，新城疫疫苗+IL-2(50ug)組，新城疫疫苗+IL-2(250ug)組。所有免疫組均于8日齡分別免疫接種相應(yīng)疫苗，18天后各組均取10只雞用于動物攻毒保護試驗，并進行免疫器官指數(shù)、血清抗體效價和外周血T淋巴細胞亞群的測定，試驗結(jié)果表明：重組IL-2蛋白增強了新城疫疫苗的免疫效果，提高了血清中抗體水平、T淋巴細胞CD3+、CD4+、CD8+亞群水平、CD4+/CD8+的比值和各免疫器官指

4、數(shù)，且部分指標(biāo)差異達到顯著水平(P＜0.05)，促進雞免疫器官的生長發(fā)育，增強雞的免疫功能。 試驗三固始雞重組IL-2作為免疫增強劑對雞志賀氏菌滅活苗免疫效果的影響。5日齡200只雞隨機分為5組，每組40只雞(公母各半)，即空白對照組，雞志賀氏菌苗組，雞志賀氏菌苗+IL-2(10ug)組，雞志賀氏菌苗+IL-2(50ug)組，雞志賀氏菌苗+IL-2(250ug)組。所有免疫組于21日齡分別免疫接種相應(yīng)疫苗，20天后各組均取10只

5、雞用于動物攻毒保護試驗，并進行免疫器官指數(shù)、血清抗體效價和外周血T淋巴細胞亞群的測定，試驗結(jié)果表明：重組IL-2蛋白增強了雞志賀氏菌苗的免疫效果，提高了血清中抗體水平、T淋巴細胞CD3+、CD4、CD8+亞群水平、CD4+/CD8+的比值和各免疫器官指數(shù)，且部分指標(biāo)差異達到顯著水平(P＜0.05)，促進雞免疫器官的生長發(fā)育，增強雞的免疫功能。 本研究結(jié)果表明，固始雞重組IL-2蛋白可作為免疫增強劑代替其他佐劑來使用，且很少量的I