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文檔簡(jiǎn)介
1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文鵝細(xì)小病毒VP3基因克隆及重組禽痘病毒轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建姓名:田麗紅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專(zhuān)業(yè):預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師:賈永清王君偉2002.5.1堡主蘭垡堡蘭苧塑塵堡苧∑!!苧里塞墮墨蔓塑苧壟墮蘭壁堡塑堡塑塑壁堡苧查些查蘭CloningofVP3GeneofGooseParvovirusandConstructionofRecombinantFowlpoxVirusTransferVectorABSTRACTnlepath
2、ogenofgooseplaque,gooseparvovims(GPV)carlcauseacuteinfectiousdiseasecharacterizedbyacuteintestitisandinflammationofliverkidneyandheartingoslingsandMuscovyduckingsunderlmonthofage,whichthreatenthegooseindustryGooseplaqueW
3、aSfirstrepeltedinChinain1956,followedbyseveralreportsofthediseaseandthevirusisolationinmanycountriesThepurposeofthisstudywastoclonethemajorstructuralproteinVP3ganeofGPVH1isolateafterPCR,andexpressbyprotokaryoticandeukary
4、oticexpressingsystem,thendevelopmoleculardiagnosticreagentofgooseplaqueandconstlXlCtrecombinantfowlpoxVillBlifevectorvaccineInthisresearch。theGPVH1isolatew∞propagatedwith13day’SduckembryosApairofprimersGF/GRusedtoamplifr
5、VP3ganeWaSdesignedusingOli904lsoftwareaccordingtothewholenucleotidesequenceofGPVBisolatepublishedbyZadoriThemajorstructuralproteinVP3goneWaSamplifiedfromtheDNAofGPVHIisolatebyPolymerasechainreaction(PCR)andthenclonedinto
6、pMDl8TvecterTherecombinantptasmidWaSidentifiedwithrestrictionendonucleasePC&tbensequenced111eresultofseouenceanalysisshowedthattheVP3goneis1605bpandincludsacompleteopenreadingflameencodingaproteinof534aminoacidsTheHlisol
7、ateshares985%and983%identitywithBisolateatnucleotideandaminoacidlevelsrespectively24nucleotidesdifferencesexistedbetweentheVP3geneofHlandBisolatesKremainlydistributedfrom312bpto417bpand791bptO】276bp,thetwegionsmightbemai
8、nlythehighmutationregionsThededucedaminoacidsequenceofHIisolatehasnineaminoacidsdifferenceswithGPVBisolatewhichlocatesmainlyintheregionfrom266aatO417anVP3geneofHIisolateofgooseparvovirusderivedfromrecombinantplasmidpPROE
9、XHTbVP3WassubelonedintoEcoRIsiteofpSY538andthe∞portergeneLacZwithpromoterpl】WasclonedjntoSmaIsiteofrecombinantplasmidBothVP3geneandLacZgenewereclonedintoNot[siteofpSY681,recombinantFPVtransfervectorcontainingVP3geneofGPV
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