藍(lán)舌病病毒1型DNA疫苗及重組禽痘病毒載體疫苗的研究.pdf

1、藍(lán)舌病(Bluetongue，BT)是由呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬藍(lán)舌病病毒(Bluetongue virus，BTV)引起的一種反芻動物的蟲媒傳染病，主要感染綿羊、山羊、牛、鹿和駱駝等。根據(jù)BTV表面蛋白VP2抗原性不同，BTV目前至少可以分為27個不同血清型，在我國已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的血清型有BTV-1，2，3，4，12，15，16七個血清型，其中1型和16型是我國主要流行血清型。
　　疫苗免疫是預(yù)防和控制藍(lán)舌病最有效的方法。目前，市場上應(yīng)

2、用的藍(lán)舌病病毒疫苗主要是弱毒苗及滅活苗，但這兩種疫苗均存在一定的缺陷。滅活苗影響流行病學(xué)監(jiān)測，弱毒苗可能會產(chǎn)生毒力殘留及與流行野毒株發(fā)生基因重組。因此，研制新型的更為安全有效的疫苗對于藍(lán)舌病的防控顯得尤為重要。
　　本研究分別構(gòu)建了3種表達(dá)藍(lán)舌病病毒1型(BTV-1)表面蛋白VP2、VP5及共表達(dá)(VP2+VP5)的重組禽痘病毒載體疫苗及重組DNA疫苗，分別命名為rFPV-VP2、rFPV-VP5、rFPV-(VP2+VP5)、p

3、CAG-VP2、pCAG-VP5和pCAG-(VP2+VP5)。首先在BALB/c小鼠模型上對其免疫效果進(jìn)行了系統(tǒng)評價。我們采取了3種不同的免疫策略:DNA疫苗首免及加免;rFPV疫苗首免及加免;DNA疫苗首免、rFPV疫苗加免。而每一種免疫策略中又包含了3種不同的免疫方式，即VP2單獨(dú)免疫組、VP2和VP5聯(lián)合免疫組以及共表達(dá)(VP2+VP5)組。結(jié)果表明，在3種免疫策略中，DNA疫苗首免、rFPV疫苗加免這一策略可以更好的誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)

4、生體液免疫及細(xì)胞免疫;而在每一種免疫策略中，共表達(dá)(VP2+VP5)免疫組的免疫效果均優(yōu)于VP2單獨(dú)免疫組或VP2和VP5聯(lián)合免疫組。在所有免疫組中，用DNA疫苗pCAG-(VP2+VP5)首免、rFPV-(VP2+VP5)加免是最佳的免疫策略，可以誘導(dǎo)產(chǎn)生最高的中和抗體及最佳的細(xì)胞免疫反應(yīng)。
　　基于在小鼠實(shí)驗(yàn)上的結(jié)果，本研究進(jìn)一步將DNA疫苗pCAG-(VP2+VP5)首免、rFPV-(VP2+VP5)加免這一免疫策略在藍(lán)舌病

5、本體動物綿羊上進(jìn)行了系統(tǒng)的免疫評價。在綿羊上的研究結(jié)果表明，用pCAG-(VP2+VP5)首免、rFPV-(VP2+VP5)加免同樣可以在藍(lán)舌病本體動物綿羊上誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的中和抗體及良好的細(xì)胞免疫反應(yīng)。在加強(qiáng)免疫后2周，中和抗體滴度最高可達(dá)188.36，高于文獻(xiàn)報道的BT重組金絲雀痘疫苗和VLP疫苗在綿羊上誘導(dǎo)產(chǎn)生的中和抗體滴度。
　　BTV攻毒試驗(yàn)需要在生物安全三級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，由于試驗(yàn)條件的限制，目前還未進(jìn)行下一步的攻毒試驗(yàn)。

6、雖未進(jìn)行攻毒保護(hù)的研究，但是據(jù)已有文獻(xiàn)報道，BTV疫苗免疫保護(hù)效果與中和抗體滴度和細(xì)胞免疫反應(yīng)有著密切的關(guān)系。本試驗(yàn)用DNA疫苗pCAG-(VP2+VP5)首免、重組禽痘病毒疫苗rFPV-(VP2+VP5)加免后能夠產(chǎn)生高滴度的中和抗體和良好的細(xì)胞免疫反應(yīng)，因此我們有理由推測用pCAG-(VP2+VP5)首免、rFPV-(VP2+VP5)加免這一免疫方式可以對綿羊提供良好的免疫保護(hù)。本研究構(gòu)建的藍(lán)舌病病毒1型DNA疫苗及重組禽痘病毒疫苗