GPV與GPMV重組禽痘病毒轉(zhuǎn)移載體和DNA疫苗的構(gòu)建.pdf

1、鵝細(xì)小病毒(gooseparvovirus)和鵝副粘病毒(gooseparamyxovirus)分別是小鵝瘟和鵝副粘病毒病的病原。小鵝瘟和鵝副粘病毒病都是養(yǎng)鵝生產(chǎn)中的烈性傳染病，發(fā)病范圍較廣。除了小鵝瘟在非洲和美洲還未見(jiàn)報(bào)道外，幾乎在世界各國(guó)均有暴發(fā)這兩種疫病的報(bào)道。近年來(lái)，隨著規(guī)模養(yǎng)鵝數(shù)量的增加，這兩種疫病的危害性顯得越來(lái)越突出。疾病暴發(fā)時(shí)來(lái)勢(shì)迅猛，往往來(lái)不及進(jìn)行有效治療即造成染病鵝的死亡，而且還有可能造成細(xì)菌和真菌的繼發(fā)性感染。各個(gè)

2、品種的鵝均能感染這兩種疾病，不僅小鵝易感，大鵝也易感。染病鵝死亡率較高，尤其是10日齡內(nèi)的雛鵝死亡率可達(dá)100％，給養(yǎng)鵝業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)及大的經(jīng)濟(jì)損失。雛鵝患病時(shí)，這兩種疾病的癥狀類(lèi)似，基層獸醫(yī)工作人員和養(yǎng)殖單位經(jīng)常將兩種疾病混淆。目前對(duì)這兩種疾病尚無(wú)有效的治療方法，仍以預(yù)防為主，所以對(duì)于防治這兩種疫病的疫苗研究工作尤為重要?！　☆A(yù)防這兩種疫病的疫苗目前只是傳統(tǒng)的滅活苗和弱毒苗，隨著基因工程手段向疫苗研制工作的技術(shù)滲透，基因工程疫苗在疫病預(yù)

3、防工作方面逐漸成為研究的熱點(diǎn)，其中以病毒為載體的重組疫苗和DNA疫苗尤為突出。這兩種疫苗是借助分子生物學(xué)手段將外源特異性抗原基因分別重組到病毒活載體和構(gòu)建到DNA疫苗表達(dá)載體上，在注射到宿主體內(nèi)后，使外源基因進(jìn)行高效、持久的表達(dá)，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，達(dá)到預(yù)防疾病的作用。這兩種疫苗有各自的優(yōu)點(diǎn)，重組禽痘病毒疫苗研究得相對(duì)來(lái)說(shuō)較早，也比較深入，引起免疫應(yīng)答的效果也比較好；DNA疫苗雖然還處于研究階段，但它除了具有常規(guī)疫苗的各種優(yōu)點(diǎn)以

4、外，還具有生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低廉和安全性高等優(yōu)點(diǎn)，而且對(duì)它的研究還在不斷完善，開(kāi)發(fā)潛力十分巨大。DNA疫苗的眾多特點(diǎn)無(wú)疑已使其成為繼滅活苗、弱毒苗和亞單位苗之后的第三代疫苗杰出代表?！　”緦?shí)驗(yàn)是根據(jù)鵝細(xì)小病毒和鵝副粘病毒的生物學(xué)特點(diǎn)和當(dāng)前疫苗研究工作的趨勢(shì)所展開(kāi)的，總共分為兩部分：(1)擴(kuò)增出鵝細(xì)小病毒疫苗株的結(jié)構(gòu)蛋白基因VP3，并構(gòu)建出重組質(zhì)粒pcDNA3.1-VP3。然后將含有巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子PCMV、VP3基因、B

5、GHpA三部分的DNA片段PCMv-VP3-BGHpA插入到分別帶有鵝副粘病毒囊膜糖蛋白基因HN和F的重組質(zhì)粒pcDNA3.1-F和pcDNA3.1-HN上，成功構(gòu)建出雙基因DNA疫苗重組質(zhì)粒pcDNA3.1-VP3-F、pcDNA3.1-VP3-HN。(2)將重組質(zhì)粒pSY538-VP3上含有啟動(dòng)子LP2EP2和VP3基因的片段LP2EP2-VP3插入到重組質(zhì)粒pSY681-F和pSY681-HN中，構(gòu)建出雙基因重組禽痘病毒轉(zhuǎn)移載體p