鵝細(xì)小病毒延邊株VP3基因真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建及在Vero細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、鵝細(xì)小病毒病是危害養(yǎng)鵝業(yè)發(fā)展的最重要的傳染病之一，該病主要感染10日齡以內(nèi)的雛鵝或雛潘鴨，雛鵝或雛潘鴨感染該病后，多呈現(xiàn)急性或者亞急性敗血性傳染病，由于鵝細(xì)小病毒病傳播迅速，病死率高，病程較短，所以一旦流行該病，給養(yǎng)殖者帶來(lái)的巨大經(jīng)濟(jì)損失，由于該病有上述特點(diǎn)，所以有很多學(xué)者對(duì)鵝細(xì)小病毒病進(jìn)行研究和關(guān)注。該病的預(yù)防方法，都存在著保護(hù)力低、成本高、特異性不強(qiáng)等一種或多種缺點(diǎn)，目前尚無(wú)有效的藥物或疫苗控制該病的流行與發(fā)展。鵝細(xì)小病毒VP3基因

2、是該病毒的主要衣殼蛋白和重要保護(hù)性抗原，具有高度的保守性，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生中和性抗體?；蚬こ桃呙缟a(chǎn)成本低，使用方便，接種后可長(zhǎng)期刺激動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生抗體，保護(hù)時(shí)間長(zhǎng)，易于在臨床上應(yīng)用推廣。
　　本試驗(yàn)根據(jù)發(fā)表的鵝細(xì)小病毒VP3基因序列，利用引物設(shè)計(jì)軟件根據(jù)已發(fā)表的基因設(shè)計(jì)了1對(duì)引物，該引物具有一定的特異性，應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增鵝細(xì)小病毒VP3基因，將鑒定正確的VP3基因克隆到PMD18—T Simple載體上

3、，進(jìn)行PCR、雙酶切鑒定和測(cè)序鑒定，將鑒定正確的PMD18—VP3基因，連接到真核表達(dá)載體PVAXI上，并進(jìn)行PCR、雙酶切鑒定和測(cè)序鑒定，構(gòu)建了真核表達(dá)載體PVAXI-VP3基因，將PVAX—VP3基因，轉(zhuǎn)染到Vero細(xì)胞中，觀察是否能在Vero細(xì)胞中，觀察是否能在Vero細(xì)胞中進(jìn)行瞬間表達(dá)。
　　結(jié)果表明，PCR擴(kuò)增VP3基因片段大小為980bp，雙酶切鑒定，目的基因片段大小為980bp，測(cè)序結(jié)果與鵝細(xì)小病毒 B株序列進(jìn)行同源