小鵝瘟病毒延邊株VP3基因的原核表達(dá)及免疫性分析.pdf

1、小鵝瘟是由小鵝瘟病毒引起的主要侵害4-20日齡雛鵝和雛番鴨的一種急性或亞急性、高度接觸性和敗血性傳染病，以急性腸炎及肝、腎、心等實(shí)質(zhì)臟器炎癥為主要特征。該病病程短，傳播速度快，死亡率高，是目前危害養(yǎng)鵝業(yè)健康發(fā)展的最重要的傳染病之一。
　　小鵝瘟病毒是細(xì)小病毒科、細(xì)小病毒屬成員，屬自主復(fù)制型細(xì)小病毒。病毒基因組為單股、線性DNA，核甘酸序列長(zhǎng)約5.lkb,含有兩個(gè)開放閱讀框架(ORF)，左側(cè)ORF(LORF)編碼非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和N

2、S2；右側(cè)ORF(RORF)編碼3種結(jié)構(gòu)蛋白(VP)，即VPl、VP2、VP3。其中VP3是該病毒的主要衣殼蛋白和重要保護(hù)性抗原，且能誘導(dǎo)機(jī)體中和抗體。因此小鵝瘟病毒VP3基因在該病的診斷及預(yù)防上具有及其重要的意義。
　　本試驗(yàn)根據(jù)GenBank發(fā)表的小鵝瘟病毒B株全基因序列，針對(duì)VP3基因保守區(qū)，設(shè)計(jì)了一對(duì)擴(kuò)增主要結(jié)構(gòu)蛋白VP3基因的特異性引物，對(duì)小鵝瘟病毒延邊分離株基因組DNA進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，得到了1457bp小鵝瘟VP3基

3、因片段，對(duì)所克隆的VP3基因序列與基因庫(kù)中已發(fā)表的B株進(jìn)行比較分析，結(jié)果表明同源性高達(dá)96.8％，從而證明了該基因片段為小鵝瘟VP3基因。將VP3基因克隆至原核表達(dá)載體pGEX-4T-1上，經(jīng)PCR鑒定及酶切鑒定，證明成功構(gòu)建了表達(dá)載體pGEX-VP3。將構(gòu)建好的表達(dá)載體，經(jīng)1 mmol/L的IPTG誘導(dǎo)，在大腸桿菌BL21中進(jìn)行表達(dá)，經(jīng)過8 h表達(dá)量達(dá)到高峰。該融合蛋白pGEX-VP3的分子量為81 ku，表達(dá)蛋白大部分以包涵體的形式