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文檔簡介
1、將鴨瘟強毒AV1221株一百倍稀釋，接種12日齡鴨胚絨毛尿囊腔，增殖病毒。根據(jù)GenBank中已發(fā)表鴨瘟弱毒株序列，設(shè)計合成四條引物，以病毒DNA為模板，用PCR方法，分段擴增UL24-TK(414bp)、UL24-25(1813bp)基因片段，并用巢式PCR進行目的DNA的篩選。將擴增得到的基因克隆到pMD18-T載體上，經(jīng)藍白斑和PCR鑒定篩選出陽性克隆進行序列測定，用生物學(xué)軟件將所測序列進行編輯，然后將其與弱毒序列和其它α-皰疹病
2、毒進行比較。結(jié)果顯示：鴨瘟病毒AV1221株UL24基因ORF全長為1230bp，編碼409個氨基酸，與參考序列比較，核苷酸同源性為99.8％，有三個核苷酸位點發(fā)生變異，氨基酸的同源性為99.8％，僅有一個核苷酸位點發(fā)生變異，與禽皰疹病毒的親緣性較近。上述結(jié)果表明，UL24基因在不同毒株間高度保守。 采用生物學(xué)軟件分析UL24蛋白的抗原性選取其中一段抗原性較好的區(qū)域，命名為UL24-1，重新設(shè)計一對引物，引物兩端有Ecoli Ⅰ
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