一株天鵝源小鵝瘟病毒的全基因序列分析及小鵝瘟病毒標(biāo)準(zhǔn)抗原抗體物質(zhì)的制備.pdf

1、1.一株天鵝源小鵝瘟病毒的全基因序列分析
　　本研究利用鵝胚從江蘇某動(dòng)物園送檢的病死天鵝病料中分離到一株小鵝瘟病毒，命名為GPV-XZ20150328，對(duì)該株病毒進(jìn)行了全基因克隆測(cè)序，拼接后獲得了GPV-XZ20150328的全基因序列。將其與GenBank上己發(fā)表的GPV全基因序列和本實(shí)驗(yàn)室分離的另一株天鵝源GPV全基因序列進(jìn)行比較，結(jié)果顯示:GPV-XZ20150328株全長(zhǎng)為5106bp，與歐洲標(biāo)準(zhǔn)B株基因序列全長(zhǎng)相同，同源

2、性為97.7％，與天鵝源GPV-SHFX(5050bp)株的同源性達(dá)99.8％，但在末端重復(fù)序列其出現(xiàn)56個(gè)基因的插入，提示，GPV在不同個(gè)體和區(qū)域可能存在一定差異。
　　2.小鵝瘟病毒標(biāo)準(zhǔn)抗原物質(zhì)的制備
　　本研究通過(guò)鵝胚接種擴(kuò)增小鵝瘟病毒，用超速離心法進(jìn)行純化，通過(guò)SDS-PAGE分析、直接透射電鏡觀察、血凝試驗(yàn)、PCR特異性分析及滅活條件測(cè)定后，用聚乙二醇6000(PEG6000)濃縮法制得GPV濃縮抗原。結(jié)果表明，擴(kuò)

3、增的病毒純度較高且無(wú)AIV、NDV、EDS76、MDPV、ALV、MDV、IBV、ILTV、IBDV、REV、DEV、TMUV等病毒的污染。滅活條件以0.3％β-丙內(nèi)酯作用48h最佳。制得的GPV濃縮抗原與特異性抗體反應(yīng)的瓊擴(kuò)效價(jià)為1∶4。將制備的濃縮抗原加入1％BSA凍存保護(hù)劑，分裝，凍干后經(jīng)物理性狀檢查、計(jì)算CV值、無(wú)菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)、均一性、穩(wěn)定性、保質(zhì)期等檢驗(yàn)后獲得了高質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)抗原，可以用于相應(yīng)檢測(cè)試劑的質(zhì)量判別。
　

4、　3.小鵝瘟病毒標(biāo)準(zhǔn)抗體物質(zhì)的制備
　　本研究采用口服和注射的途徑對(duì)雛鵝進(jìn)行四次免疫后制各了抗小鵝瘟多抗血清。利用本實(shí)驗(yàn)室保存的一株抗鵝細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株(GPV-Mab-6C8)經(jīng)Bab/c小鼠制備出抗小鵝瘟單克隆抗體。用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)，該多抗血清的AGP效價(jià)為1∶64，用GPV細(xì)胞適應(yīng)毒建立的免疫熒光檢測(cè)方法(IFA)檢測(cè)該血清，IFA效價(jià)為1∶6400，單抗的IFA效價(jià)為1∶1600。特異性鑒定結(jié)果表明制備的抗