鵝細小病毒單克隆抗體的制備及單抗雙夾心ELISA檢測方法的建立.pdf

1、鵝細小病毒病是由小鵝瘟病毒引起的雛鵝或雛番鴨的一種病毒性疾病。此病具有敗血性和高度接觸性對一月齡雛鵝發(fā)病率和死亡率高達95％-100%。由于該病病的傳染性較強、發(fā)病時間較短、死亡率較高而給我國養(yǎng)鵝業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。目前對該病診斷主要借助臨床癥狀的觀察及病理剖檢變化觀察等手段做出判斷，但僅為初步診斷，難以做出準確的診斷。想要做出較準確的診斷，常借助實驗室診斷方法。主要有瓊脂擴散試驗、病毒中和性試驗等檢測方法，但上述方法都相應(yīng)的缺乏敏

2、感性或特異性，也不適合大批量檢測等缺點。對該病治療除對雛鵝注射抗血清或卵黃抗體外尚無其它有效的辦法。由于本病在診斷、預(yù)防和治療三方面都存在弊端，因此臨床上急需要一種對該病治療效果好的生物制劑和一種簡便、快速、敏感、特異同時能大批量檢測的診斷方法。
　　本試驗利用濃縮的GPV免疫BALB/c小鼠，采用雜交瘤技術(shù)，經(jīng)間接ELISA方法篩選和有限稀釋法克隆后獲得一株抗GPV的雜交瘤細胞系（4B4）。經(jīng)鑒定，其MAb的亞型為IgG1型，輕

3、鏈為κ型。ELISA和western blotting試驗結(jié)果表明，獲得的4B4 MAb可特異性的識別GPV，并可特異性識別GPV VP3蛋白，表明4B4 MAb識別的表位可能位于GPV VP3蛋白的保守區(qū)域。
　　為建立鵝細小病毒（GPV）檢測方法，本研究以兔抗GPV IgG為捕獲抗體，抗GPV單克隆抗體為檢測抗體。通過方陣試驗確定了兔抗GPV IgG最適包被濃度為16μg/m L，抗GPV單克隆抗體最佳工作濃度為10.8μg/

4、m L，酶標二抗最佳稀釋倍數(shù)為1：4000。成功建立了檢測GPV單抗雙夾心ELISA方法，該方法對GPV檢測靈敏度達0.312μg/m L。用該法對延邊某養(yǎng)鵝場疑似小鵝瘟病的252只雛鵝進行檢測，結(jié)果陽性率為75.79%，與龔建森建立的雙抗夾心ELISA方法的檢測結(jié)果符合率達91.11%。
　　本研究制備了抗鵝細小病毒單克隆抗體，并建立了單抗雙夾心ELISA方法。為臨床研制GPV診斷試劑、治療試劑的奠定了基礎(chǔ)，同時為GPV的檢測和