豬源新甲型H1N1流感病毒的分離鑒定及其對(duì)小鼠的致病性.pdf

1、豬流行性感冒(swine influenza,SI)是由正粘病毒科A、B、C型流感病毒屬的豬流感病毒(swine influenza virus,SIV)引起的一種急性、傳染性呼吸系統(tǒng)疾病。A型豬流感病毒可以引起世界性大流行。豬的呼吸道上皮細(xì)胞不僅有禽流感病毒吸附所需要的α-2,3唾液酸受體,還具有人流感病毒吸附所需要的α-2,6唾液酸受體。因此豬既可以感染禽流感病毒也可以感染人流感病毒,豬就像一個(gè)“混合器”,不同來(lái)源的流感病毒在豬體內(nèi)

2、發(fā)生重排、突變的概率大大提高。因此,豬被認(rèn)為是新流感病毒產(chǎn)生的中間宿主。人類歷史上的三次流感病毒世界大流行(1918年的西班牙流感病毒H1N1大流行、亞洲流感病毒H2N2大流行、香港流感病毒H3N2大流行)后來(lái)證明都跟豬流感有關(guān)。因此對(duì)豬流感病毒的流行情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)具有重要的公共衛(wèi)生意義。
　　 2009年3月墨西哥新甲型流感病毒H1N1爆發(fā),并迅速形成世界性大流行,發(fā)病人群主要是學(xué)生以及青壯年人。后來(lái)的研究證明,此次大流行的新甲

3、型H1N1流感病毒是混合了禽源流感病毒、人源流感病毒和豬源流感病毒特征的重組病毒。對(duì)豬群中豬源H1N1流感病毒進(jìn)行流行病學(xué)監(jiān)測(cè)對(duì)于防止重大疫情的發(fā)生,最大程度降低經(jīng)濟(jì)損失,具有重要的意義。
　　 為了解江蘇省豬群中甲型H1N1流感的流行病學(xué)現(xiàn)狀及其病原學(xué)特征,2010年1月～2010年5月對(duì)江蘇地區(qū)的蘇北(鹽城)、蘇中(揚(yáng)州)、蘇南(無(wú)錫)三個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的屠宰場(chǎng)、養(yǎng)殖場(chǎng)及發(fā)病豬群進(jìn)行樣品的采集與病毒分離,累計(jì)采集豬鼻拭子1029份,

4、并從中分離鑒定了11株H1N1亞型豬流感病毒與2株H9N2亞型豬流感病毒。我們對(duì)其中的8株H1N1亞型的豬流感病毒進(jìn)行了全基因測(cè)序和遺傳進(jìn)化分析,發(fā)現(xiàn)8株豬源H1N1亞型流感病毒均為低致病性甲型流感病毒,分離于無(wú)癥狀豬群,屬于三重重組病毒,可能源于北美新毒株A/California/04/2009。各基因與其來(lái)源毒株相比均尚未再發(fā)生基因重排,但HA蛋白中決定唾液酸(SA)受體結(jié)合類型的相關(guān)位點(diǎn):225位有3個(gè)毒株由D突變?yōu)镚,240位有

5、5個(gè)毒株由Q突變?yōu)镽,增強(qiáng)了對(duì)Saα2,3Gal受體的結(jié)合能力:NA蛋白8個(gè)潛在的糖基化位點(diǎn)中,也有2個(gè)毒株的第50位NQS氨基酸替換為NPS使其潛在糖基化位點(diǎn)缺失,這些都可能是病毒在豬群中適應(yīng)的結(jié)果,推測(cè)新甲型H1N1流感病毒在豬體內(nèi)經(jīng)過(guò)一段時(shí)間適應(yīng)后很有可能在我國(guó)豬群中成為新的優(yōu)勢(shì)流行株。
　　 為了對(duì)分離到的豬源甲型H1N1流感病毒的致病性有進(jìn)一步的了解,隨機(jī)選取一株分離毒株:A/Swine/Jiangsu/48/2010

6、,50μl,1×107·68EID50/只,滴鼻接種ICR小鼠,并設(shè)接觸組與對(duì)照組,以研究病毒的水平傳播能力。接種后每天收集體重?cái)?shù)據(jù),并在第3、7、11、14天捕殺小鼠,觀察心、肝、脾、肺、腎、氣管的組織病理學(xué)變化,并進(jìn)行病毒分離。結(jié)果表明:攻毒組小鼠與接觸組小鼠體重早期有不同程度的下降,后期逐漸恢復(fù)。攻毒小鼠出現(xiàn)了以肺損傷為主要特征的病理變化,接種第3天、7天捕殺的小鼠分離出了病毒,第11天與14天捕殺的小鼠未能分離出病毒。接觸組小鼠