納米材料PAMAM G3及甲型H1N1流感病毒導(dǎo)致小鼠急性肺損傷的致病機(jī)理研究.pdf

1、第一部分:
　　 納米材料PAMAMG3誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷的致病機(jī)理研究
　　 納米材料PAMAMG3引起A549細(xì)胞自噬性死亡，并導(dǎo)致小鼠急性肺損傷
　　 作為一項(xiàng)重要的和新興的產(chǎn)業(yè)，納米技術(shù)正逐步從研究領(lǐng)域涉及到日常生產(chǎn)生活。然而，直到最近，人們才開始關(guān)注納米材料對人體及環(huán)境的安全性問題。已經(jīng)有研究稱：納米材料可以造成肺部的疾病或損傷，但其所導(dǎo)致的肺部損傷的分子機(jī)制卻仍然沒有被揭示出來。
　　 本文所

2、研究的納米材料是一種具有高度支化、對稱、呈輻射狀的大分子——聚酰胺-胺樹枝狀大分子納米材料(PAMAMdendrimer)。它由中心核、內(nèi)層重復(fù)的分支亞單位以及表面的功能基團(tuán)組成。整代的PAMAM納米材料表面的功能基團(tuán)為氨基，半代的PAMAM納米材料表面的功能基團(tuán)為羧基。由于氨基帶有正電荷，整代的PAMAM常被用作載體，遞送DNA，進(jìn)行細(xì)胞或生物體內(nèi)表達(dá)。對于這些PAMAM材料生物安全性的研究甚少。
　　 本文中，我們測定了PA

3、MAMG1～G8以及G3.5、G4.5、G5.5和G7.5對A549細(xì)胞的影響。發(fā)現(xiàn)從PAMAMG3到PAMAMG8均會引起A549細(xì)胞的死亡。而表面基團(tuán)為陰離子的半代PAMAM對A549細(xì)胞的活性不會產(chǎn)生影響。我們對PAMAMG3引起的A549細(xì)胞死亡進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)PAMAMG3不是通過凋亡通路引起的A549細(xì)胞死亡，而是引起細(xì)胞自噬性死亡。給予自噬的抑制劑3MA或是利用siRNA技術(shù)抑制自噬基因ATG6的表達(dá)，可以有效地緩解PAM

4、AMG3引起的A549細(xì)胞死亡。同時，自噬性細(xì)胞死亡也在PAMAMG4、G5、G6、G7和G8引起的A549細(xì)胞死亡中扮演著重要角色。
　　 同時，我們對PAMAMG3引起的自噬性細(xì)胞死亡的信號通路進(jìn)行了分析。發(fā)現(xiàn)PAMAMG3通過Akt-TSC2-mTOR的信號通路引起A549發(fā)生自噬性細(xì)胞死亡。
　　 此外，我們發(fā)現(xiàn)PAMAMG3會導(dǎo)致小鼠死亡，引起小鼠急性肺損傷。而自噬的抑制劑3MA有效地緩解PAMAMG3引起的小

5、鼠死亡，改善小鼠的急性肺損傷程度。說明自噬在PAMAMG3引起的小鼠死亡中發(fā)揮著重要作用。
　　 第二部分:
　　 甲型H1N1流感病毒（BJ株）導(dǎo)致小鼠急性肺損傷的致病機(jī)理研究
　　 甲型H1N1流感病毒導(dǎo)致小鼠急性肺損傷的致病機(jī)理研究
　　 2009年3月，從美國和墨西哥流感樣患者呼吸道標(biāo)本中，鑒定出新的豬源性甲型H1N1流感病毒。該病毒可在人際間傳播，已蔓延100多個國家、地區(qū)。人感染后的主要臨床表

6、現(xiàn)為急性呼吸道感染癥狀，部分患者病情進(jìn)展迅速，繼發(fā)急性呼吸窘迫綜合征、肺出血、呼吸衰竭和多器官損傷，導(dǎo)致死亡。感染甲型H1N1流感病毒導(dǎo)致的急性呼吸系統(tǒng)損傷的致病機(jī)制尚不清楚。
　　 本研究通過建立甲型H1N1流感病毒感染的小鼠模型，揭示NF-κB信號的激活，可誘發(fā)炎癥相關(guān)因子產(chǎn)生，形成細(xì)胞因子風(fēng)暴（Cytokinestorm），在小鼠感染病毒后導(dǎo)致的急性肺損傷中發(fā)揮重要致病作用。
　　 通過檢測小鼠的死亡率、肺組織濕干

7、比、肺組織病理、支氣管肺泡灌洗液中的炎癥相關(guān)因子以及肺組織中單核巨噬細(xì)胞磷酸化NF-κB及IκB-α的表達(dá)等指標(biāo)，比較不同流行株的甲型H1N1流感病毒對不同周齡、不同品系小鼠的致病性。
　　 結(jié)果：表明：與CA07株甲型H1N1流感病毒比較，BJ株對4周齡的C57BL/6小鼠具有更強(qiáng)的致肺損傷能力，其在小鼠肺組織中的復(fù)制能力也明顯高于CA07株甲型H1N1流感病毒。
　　 感染甲型H1N1流感病毒BJ株的小鼠，在連續(xù)給予