甲型H1N1流感病毒致宿主細(xì)胞氧化損傷機(jī)制的研究.pdf

1、廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文甲型H1N1流感病毒致宿主細(xì)胞氧化損傷機(jī)制的研究姓名：馬紅梅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：肖洪廣2011-05廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 甲型 H1N1 流感病毒致宿主細(xì)胞氧化損傷機(jī)制的研究 3 為氧化損傷修復(fù)酶參與 DNA 過度氧化修復(fù)過程， 可能在流感病毒致宿主細(xì)胞凋亡發(fā)生發(fā)展的過程中起到一定的作用。 目前國際上對(duì)流感病毒感染后宿主細(xì)胞 DNA 氧化損傷機(jī)制的研究鮮有報(bào)道， 本研究將從 DNA 氧

2、化損傷修復(fù)方面探討流感病毒致病機(jī)制。 目的 本課題在流感病毒感染宿主細(xì)胞可導(dǎo)致脂質(zhì)氧化損傷和 DNA 堿基氧化損傷的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討其可能的作用機(jī)制。揭示流感病毒致宿主細(xì)胞的氧化損傷在宿主細(xì)胞凋亡中的作用， 即 DNA 的過度氧化損傷而氧化修復(fù)酶的表達(dá)不足以對(duì)抗過高的氧化損傷，最終導(dǎo)致宿主細(xì)胞的凋亡和癥狀的發(fā)生發(fā)展。本研究旨在加強(qiáng)對(duì)流感病毒致宿主細(xì)胞氧化應(yīng)激機(jī)制的認(rèn)識(shí)，為該病毒致病機(jī)理研究提供了新的思路，為抗流感藥物的開發(fā)提供新的靶點(diǎn)

3、，也為高致病性人禽流感的預(yù)防、防控提供了新的視角和依據(jù)。 方法 第一部分 流感病毒感染細(xì)胞模型的建立 采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng) MDCK 細(xì)胞。雞胚尿囊腔接種 H1N1 型流感病毒，經(jīng)病毒復(fù)制、 擴(kuò)增、 收獲病毒， 通過檢測 MDCK 細(xì)胞的半數(shù)組織細(xì)胞感染劑量 （TCID50） ，確定該毒株實(shí)驗(yàn)用毒劑量。 第二部分 流感病毒 H1N1 感染細(xì)胞后 MTH1 基因表達(dá)的研究 細(xì)胞培養(yǎng)后提取總 R N A ，經(jīng)優(yōu)化 R T - P C R 反

4、應(yīng)檢測細(xì)胞內(nèi) M T H 1 基因的表達(dá)量。條帶經(jīng) Scion Immage 軟件分析并與內(nèi)參基因 G A P D H 相比，對(duì)體系的準(zhǔn)確性、重復(fù)性和靈敏度進(jìn)行分析。MDCK 細(xì)胞培養(yǎng)后，H1N1 型流感病毒感染 0 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h，在各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測：經(jīng) RT- PCR 反應(yīng)檢測細(xì)胞內(nèi) MTH1 基因的相對(duì)表達(dá)量。 第三部分 流感病毒 H1N1 感染細(xì)胞后 OGG1 基因的表達(dá)