H1N1亞型流感病毒Vero細胞冷適應株的選育及甲型流感病毒Vero細胞適應株的ELISA檢測.pdf

1、流感病毒減毒活疫苗采用滴鼻途徑免疫，能激發(fā)機體的細胞免疫、體液免疫和黏膜免疫，具有減免注射疼痛，免疫保護作用持久，有一定的交叉保護作用等優(yōu)點。目前上市的流感病毒減毒活疫苗是以雞胚為培養(yǎng)基質生產的。然而，使用雞胚生產流感疫苗還存在著許多不足:遺傳性狀穩(wěn)定性差，降低了保護效果;交叉保護作用差;容易被其他致病因子所污染;純化工藝復雜;難以大規(guī)模生產等。Vero細胞是WHO推薦用于疫苗生產的細胞基質，用其培養(yǎng)的流感病毒遺傳穩(wěn)定性好，質量更高，還

2、可實現規(guī)?；a以滿足流感大流行的需要。
　　流感病毒Vero細胞冷適應株是用流感病毒Vero細胞適應株通過在低溫下連續(xù)傳代培養(yǎng)選育而出。本實驗通過溫度梯度降溫法成功選育出了一株能在25℃生長的H1N1亞型流感病毒冷適應株，血凝效價維持在1∶512以上。對該毒株在低溫培養(yǎng)時的PH值、TPCK胰酶的添加、BSA終濃度等條件進行了優(yōu)化，并確定了病毒的適宜收獲時間。通過免疫熒光、血凝抑制試驗以及感染性滴度測定對該毒株的生物學性狀進行了鑒

3、定。實驗結果表明該毒株與H1N1亞型Vero細胞適應株為同一亞型。通過對該毒株在25℃、33℃、39℃的TCID50ml-1的比較，確定該毒株具有ts表型和ca表型。通過RT-PCR擴增出該株流感病毒的8個基因片段，并將NA、NS、NP、M四個基因成功連接到雙向轉錄載體PHW2000上，并進行基因測序分析。通過與對應母本株基因的比對，確定了突變位點，為流感病毒冷適應的相關基因研究奠定了基礎。
　　為了便于Vero細胞冷適應株的選育