一株H1N1亞型豬流感病毒的分離鑒定及其脂質(zhì)體疫苗的制備.pdf

1、豬流感（Swine influenza，SI）是由豬流感病毒（Swine influenza virus，SIV）引起的一種呼吸道傳染病，對各年齡、品種豬均有感染性。臨床癥狀表現(xiàn)為高熱、咳嗽、器官衰竭、高發(fā)病率、低死亡率，通常與其他病原混合感染造成病情加重，死亡率增高。在生產(chǎn)實(shí)踐中豬流感會阻礙豬體增重，降低肉料比，直接影響豬群健康狀態(tài)，對養(yǎng)豬業(yè)危害極大。疫苗免疫是一種有效的可以控制豬流感病毒傳播的手段。目前應(yīng)用最廣泛的豬流感疫苗為全病毒

2、滅活疫苗，雖然其具有高效、低成本等優(yōu)點(diǎn)，但也存在產(chǎn)生抗體較慢、誘導(dǎo)細(xì)胞免疫能力弱、應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)等不足。因此，研制出既高效又安全的豬流感疫苗勢在必行。
　　本研究于2015年5月從諸城市某屠宰場隨機(jī)采集豬鼻拭子468份，接種10日齡SPF雞胚，分離到一株豬流感病毒，將其命名為：A/swine/Zhucheng/43/2015（H1N1）。對該毒株8個(gè)基因片段進(jìn)行了遺傳進(jìn)化分析，并研究了其對小鼠的致病性。結(jié)果顯示， HA片段的裂解位點(diǎn)為

3、PSIQSR↓GL，無多個(gè)堿性氨基酸的插入，為低致病性SIV。遺傳進(jìn)化分析結(jié)果顯示分離株的HA、M、NA片段處于歐洲類禽H1N1亞型SIV分支；NP、PA、PB1、PB2片段處于2009甲型H1N1分支；NS片段處于北美三源重排分支；小鼠致病性研究表明該毒株可感染小鼠并引起肺臟組織病理學(xué)變化，但對小鼠無致死性。推斷該毒株為一株低致病性的新型三源重排SIV。
　　通過原核表達(dá)的方法制備重組HA1蛋白，對HA1蛋白進(jìn)行純化濃縮后采用逆

4、相蒸發(fā)法制備脂質(zhì)體疫苗。在室溫下用 Zetasizer3000HS激光衍射粒度分析儀對制得的疫苗粒徑進(jìn)行分析，結(jié)果表明疫苗粒徑大小集中在2-8μm，符合脂質(zhì)體疫苗的標(biāo)準(zhǔn)要求。電鏡結(jié)果顯示脂質(zhì)體疫苗大小較為均勻，脂質(zhì)體包被蛋白結(jié)構(gòu)清晰，符合預(yù)期結(jié)果。通過動(dòng)物試驗(yàn)對疫苗的免疫效果進(jìn)行評價(jià)，結(jié)果表明脂質(zhì)體疫苗免疫BalB/c小鼠后產(chǎn)生了較高的中和抗體；初次免疫后第14d對小鼠進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)，收集小鼠肺臟制備病理切片并采用熒光定量PCR法檢測各組