豬源2009甲型H1N1流感病毒的分離鑒定及其致病性的研究.pdf

1、2009年3月新甲型H1N1流感病毒在墨西哥暴發(fā)，同年4月第1株2009甲型H1N1流感病毒被分離，之后有越來(lái)越多的報(bào)道表明2009甲型H1N1流感病毒可以由人向豬傳播。研究證明，2009甲型H1N1流感病毒是混合了豬源流感病毒、禽源流感病毒和人源流感病毒三者特征的重組病毒，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失，也對(duì)人類(lèi)的健康構(gòu)成威脅。因此對(duì)豬群中H1N1流感病毒進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查和監(jiān)測(cè)具有重要的公共衛(wèi)生意義。本實(shí)驗(yàn)從2013年1月～2014年12月

2、對(duì)廣西省部分養(yǎng)豬場(chǎng)及發(fā)病豬群進(jìn)行樣品采集和病毒的分離，目的為研究該區(qū)域豬群中流行的流感病毒亞型、變異規(guī)律和發(fā)病情況，為豬流感的研究和防控提供參考。實(shí)驗(yàn)成果如下:
　　1.從發(fā)病豬群分離鑒定得到12株H1N1亞型豬流感病毒，其中1株為2009甲型H1N1流感病毒。本研究從2013年1月～2014年12月采集至廣西8個(gè)市（地區(qū)）發(fā)病豬群的豬組織病料共1609份進(jìn)行病毒分離。經(jīng)9～11日齡SPF雞胚分離得到12株豬流感病毒株。運(yùn)用RT-

3、PCR的方法對(duì)12株病毒的HA和NA基因進(jìn)行擴(kuò)增和序列測(cè)定分析，鑒定12株病毒均為H1N1亞型，其中1株為2009甲型H1N1流感病毒。將這株豬源2009甲型H1N1流感病毒株作為本實(shí)驗(yàn)研究的對(duì)象，并命名為A/swine/Guangxi/18/2013(H1N1)。
　　2.遺傳進(jìn)化分析表明分離株8個(gè)基因片段與其他2009甲型H1N1流感病毒的進(jìn)化關(guān)系一致。對(duì)A/swine/Guangxi/18/2013(H1N1)全基因組的8個(gè)

4、基因片段進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增、克隆及序列測(cè)定，運(yùn)用MegAlign軟件進(jìn)行核苷酸和氨基酸的比較分析，再通過(guò)MEGA5.0軟件構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹(shù)。進(jìn)化分析結(jié)果表明分離株與2009甲型H1N1流感毒株處于同一個(gè)進(jìn)化枝，與A/California/04/2009(H1N1)親緣關(guān)系很近，起源于同一祖先。其基因來(lái)源情況為:HA、NS和NP基因來(lái)源于古典型H1N1豬源譜系，NA和M基因來(lái)源于類(lèi)禽型H1N1豬源譜系，PA和PB2基因來(lái)源于禽源譜系，PB