2株豬源H9N2亞型流感病毒的分離鑒定及對小鼠致病性的研究.pdf

1、流感病毒現(xiàn)已遍布世界各地，因豬的種間屏障較低，易形成“人-豬-禽”的傳播鏈，并在此期間發(fā)生基因重配，產(chǎn)生新的基因型，威脅公共衛(wèi)生安全。
　　本研究通過應用RT-PCR和雞胚接種的方法，對2011年從廣西百色市樂業(yè)縣豬場中分離到的2株H9N2亞型流感病毒進行了生物學特性、分子遺傳規(guī)律、對小鼠的致病性等方面的研究。根據(jù)在NCBI上BLAST的結果確定這2株分離株為H9N2亞型流感病毒，本實驗室參考國際命名規(guī)則進行，簡稱為SW/GX/P

2、2/2011和SW/GX/P3/2011。其中，PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS的核苷酸ORF分別為2280bp、2274bp、2151bp、1683bp、1497bp、1410bp、982bp和838bp。這2株分離株與近年來廣西分離株A/Canine/Guangxi/1/2011和A/Equine/Guangxi/3/2011的核苷酸及氨基酸同源性都在99.0％以上。
　　根據(jù)獲得的氨基酸序列分析，2株分離株的

3、HA蛋白上第109、161、163、202和203位均高度保守，第234位為亮氨酸L，具有SAα-2，6Gal受體結合特異性，HA裂解位點為-RSSRGLF-，沒有多個氨基酸插入，屬于低致病性毒株;NA蛋白的第63～65位無缺失，而有的研究認為這3個氨基酸的缺失對于增加病毒的神經(jīng)氨酸酶活性有幫助，同時也有利于病毒從被感染細胞中釋放，其次NA在119、151、276、292以及294等位點沒有發(fā)生變異，說明SW/GX/P2/2011和SW

4、/GX/P3/2011分離株仍對神經(jīng)氨酸酶類藥物敏感;M2蛋白上的第31位發(fā)生了由S→N的突變，表明這兩株毒對金剛烷胺類藥物產(chǎn)生耐藥性;在內(nèi)部基因中，與致病力有關的基因位點PB2的627、701位，PB1的622、709位，PA的315、515位，NS的92位以及NP的319位與參考毒株相比均保守。通過2株分離株分子進化樹和同源性分析顯示，HA來源于Y280-like亞系，NA來源于G9-like亞系，M和PB2來源于G1-like亞系

5、，PB1、PA、NS和NP來源于F98-like亞系。
　　對這2株進行雞胚半數(shù)感染量(EID50)試驗得出SW/GX/P2/2011和SW/GX/P3/2011的其LgEID50/0.1mL分別為5.02以及5.23。小鼠致病性結果顯示，小鼠出現(xiàn)了以肺臟為主的病理變化，病毒能夠在肺臟以及鼻甲中復制，但復制水平有一定差異，上呼吸道的鼻甲的復制能力比下呼吸道的肺臟高。2個毒株最低均可使小鼠體重下降6％，但并未能致死小鼠，之后至第8天