致病性鴨源奈瑟菌的分離鑒定及生物學(xué)特征研究.pdf

1、2012年4月,安徽省部分規(guī)?；唸?chǎng)爆發(fā)一種以鴨眼部腫脹、眼瞼分泌物增多、眼結(jié)膜粘合以致失明的急性傳染病。該病傳播速度極快,一旦少數(shù)鴨發(fā)病,1~2天便會(huì)擴(kuò)散至全群。該病發(fā)病率較高,但死淘率較低,約在5％左右。此外,因患病鴨常發(fā)生單目或雙目失明,無(wú)法自主采食,導(dǎo)致淘汰率較高,給當(dāng)?shù)仞B(yǎng)鴨業(yè)造成了較為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
　　本研究從安徽地區(qū)鴨場(chǎng)患病鴨分離2株革蘭氏陰性球菌,對(duì)其形態(tài)學(xué)觀察、培養(yǎng)特性、生化試驗(yàn)及16SrRNA序列分析等進(jìn)行鑒

2、定。電鏡下觀察分離菌呈卵圓形或腎形,菌體長(zhǎng)約0.5-0.7μm,寬為0.5μm,呈典型奈瑟菌形態(tài)。分離菌在巧克力平板生長(zhǎng)呈灰白色,光滑,圓潤(rùn)的菌落;生化試驗(yàn)表明分離菌氧化酶、觸酶和吲哚陽(yáng)性,葡糖糖發(fā)酵陽(yáng)性,蔗糖、果糖、木糖、枸櫞酸鹽等呈陰性反應(yīng),其16SrRNA基因序列與奈瑟菌屬細(xì)菌同源性最高可達(dá)到99%。初步鑒定為奈瑟菌屬細(xì)菌,并分別命名為AH-N10株和XC株。根據(jù)奈瑟菌asd基因序列保守區(qū)設(shè)計(jì)引物,用于檢測(cè)鴨源奈瑟菌。經(jīng)特異性試驗(yàn)

3、,敏感性試驗(yàn),表明所建立的PCR檢測(cè)方法穩(wěn)定有效,敏感性較高,可用于臨床快速檢測(cè)鴨源奈瑟菌。
　　為進(jìn)一步了解鴨源奈瑟菌的生物學(xué)特性,對(duì)其親緣性、生長(zhǎng)培養(yǎng)特性、保存方式、致病性等方面進(jìn)行研究。對(duì)分離菌株的16SrRNA測(cè)序分析后,構(gòu)建了分離菌株基于奈瑟菌屬不同菌種的16SrRNA系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù),分析其同源性。結(jié)果表明分離菌株處于奈瑟菌屬進(jìn)化分枝內(nèi),與黃色奈瑟菌、粘液奈瑟菌同源性較高。分離菌株在含5%胎牛血清的液體培養(yǎng)基中8小時(shí)達(dá)到穩(wěn)定

4、期,20小時(shí)開(kāi)始進(jìn)入衰亡期,穩(wěn)定期細(xì)菌含量達(dá)到109cfu/mL。應(yīng)用甘油保存法、脫脂牛奶保存法以及冷凍干燥保存法對(duì)分離菌進(jìn)行保存效果試驗(yàn),表明甘油保存法不適用于對(duì)鴨源奈瑟菌的保存,保存的細(xì)菌會(huì)失去活性無(wú)法復(fù)蘇;脫脂牛奶保存法和冷凍干燥保存法均能達(dá)到良好的保存效果,復(fù)蘇后細(xì)菌形態(tài)等特性未發(fā)生變化。
　　通過(guò)其對(duì)雛鴨及小鼠的感染試驗(yàn)表明腿部肌肉注射108cfu分離菌,雛鴨會(huì)出現(xiàn)與臨床病鴨一致的臨床及剖檢病變,死亡率達(dá)到30%左右。分

5、離菌通過(guò)腹腔注射至小鼠體內(nèi),亦會(huì)出現(xiàn)明顯眼病病征按寇氏法測(cè)定2株鴨源奈瑟菌株的半數(shù)死亡量(LD50)分別為3.47×108,3.40×108。
　　藥物敏感性試驗(yàn)表明兩分離菌株對(duì)青霉素、喹諾酮類藥物普遍耐藥,對(duì)氨基糖苷類及氯霉素類藥物較為敏感。應(yīng)用中藥白頭翁,黃連,黃岑,黃柏,石榴皮,訶子,白芍,杖子,荊芥炭等制備了中藥方劑。通過(guò)中藥復(fù)方對(duì)鴨源奈瑟菌的體外抑菌試驗(yàn)和治療試驗(yàn)分析其抑菌及治療效果。結(jié)果表明,該中藥復(fù)方對(duì)鴨奈瑟菌的液體