一株新的人腎癌原代細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性的鑒定.pdf

1、[研究背景]
　　腎細(xì)胞癌（renal cell carcinoma，RCC）是起源于腎實(shí)質(zhì)泌尿小管上皮系統(tǒng)的惡性腫瘤，占腎臟惡性腫瘤的80％-90％。，約占成人惡性腫瘤的2％-3％。各個(gè)國(guó)家或者地區(qū)的發(fā)病率不同，發(fā)達(dá)國(guó)家發(fā)病率高于發(fā)展中國(guó)家，每年死于腎細(xì)胞癌的人數(shù)大約有10萬(wàn)多例并且發(fā)病率還在逐年遞增。我國(guó)各地區(qū)腎癌的發(fā)病率差異也較大，據(jù)全國(guó)腫瘤防治研究辦公室和衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)信息中心統(tǒng)計(jì)我國(guó)試點(diǎn)市，縣1988-1997年腫瘤發(fā)病及死亡

2、資料顯示：腎癌的發(fā)病率和死亡率均有上升趨勢(shì)；男女比例約為2：1；城市地區(qū)高于農(nóng)村地區(qū)，發(fā)病年齡可見(jiàn)于各年齡段，高發(fā)年齡為50-70歲。外科手術(shù)仍然是局部性腎癌的首選治療方法，然而對(duì)于轉(zhuǎn)移性腎癌尚無(wú)標(biāo)準(zhǔn)的治療方案仍采用內(nèi)科為主的綜合治療，極少數(shù)患者可通過(guò)外科手術(shù)而治愈。所以，研究腎細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)理和治療方法已經(jīng)成為泌尿外科臨床治療中努力的方向。
　　1988年,國(guó)內(nèi)建成了首例體外培養(yǎng)的“人腎癌細(xì)胞系”。為人腎細(xì)胞癌的基礎(chǔ)和臨床研究提

3、供了極其重要的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。但是隨著實(shí)驗(yàn)的不斷開(kāi)展，需要對(duì)細(xì)胞系進(jìn)行不斷的體外傳代,于是一些生物學(xué)特征會(huì)漸漸的改變或消失，所以不斷建立新的細(xì)胞系已經(jīng)成為研究腎細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)理和探尋新的治療方法的重要環(huán)節(jié)。
　　裸鼠，顧名思義為無(wú)毛鼠，于1962年由英國(guó)的Crist發(fā)現(xiàn)。裸鼠體內(nèi)無(wú)胸腺，因此無(wú)法生成成熟的T淋巴細(xì)胞，所以具有免疫缺陷的特性。移植于裸鼠的人體腫瘤組織，因受到較小的排斥反應(yīng)而更容易生長(zhǎng)存活。1969年，Rygaard首次

4、建立了裸鼠人結(jié)腸腺癌模型。目前為止世界上已經(jīng)建立了500種以上的人體腫瘤裸鼠模型。裸鼠現(xiàn)在已經(jīng)成為研究人體惡性腫瘤的生物學(xué)特性以及篩選針對(duì)相應(yīng)腫瘤的抗癌藥物的常用工具，其應(yīng)用范圍包括腫瘤學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)以及藥理學(xué)等各項(xiàng)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)直接對(duì)裸鼠皮下進(jìn)行手術(shù)標(biāo)本組織塊的包埋移植法其移植的成功率要高于利用手術(shù)標(biāo)本組織塊直接培養(yǎng)法以及利用手術(shù)標(biāo)本組織塊制成腫瘤細(xì)胞懸液直接注射法，成為建立腫瘤細(xì)胞系的常用方法。因此本研究根據(jù)此方法成功建立了一株穩(wěn)

5、定傳代的腎細(xì)胞癌細(xì)胞系。
　　[目的]
　　利用腎癌病人手術(shù)標(biāo)本皮下包埋于裸鼠的方法建立裸鼠移植模型,通過(guò)裸鼠間傳代及體外傳代培養(yǎng)的方法建立了一株新的人腎癌細(xì)胞系，并且初步對(duì)該細(xì)胞系進(jìn)行鑒定,為進(jìn)一步的腎癌基礎(chǔ)研究提供了實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>　　[方法]
　　1.人腎癌原代細(xì)胞系的建立
　　2008-2009年間共采集20例腎癌新鮮手術(shù)標(biāo)本，于手術(shù)后1h內(nèi)將每例標(biāo)本切取四塊0.5cm×0.5cm×0.5cm組織塊,分

6、別包埋于2只裸鼠的右后肢皮下及背部皮下,連續(xù)鼠間傳代3次,取移植瘤繼續(xù)體外培養(yǎng)傳代，連續(xù)傳110代。
　　2.人腎癌原代細(xì)胞系的生物學(xué)特性鑒定
　　對(duì)得到的細(xì)胞株進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)的觀察，繪制細(xì)胞株生長(zhǎng)曲線，細(xì)胞DNA含量測(cè)定，染色體核型分析，軟瓊脂集落形成率實(shí)驗(yàn)，刀豆球蛋白A凝集實(shí)驗(yàn)，白細(xì)胞介素6的生物活性測(cè)定及病理學(xué)檢查。
　　[結(jié)果]
　　1.人腎癌原代細(xì)胞系的建立
　　其中1只裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng),繼續(xù)傳代

7、,腫瘤生長(zhǎng)速度明顯加快。取移植瘤標(biāo)本行體外組織塊培養(yǎng)，連續(xù)傳110代后，得到人腎癌細(xì)胞株記為XJG-9201。
　　2.人腎癌原代細(xì)胞系的生物學(xué)特性鑒定
　　細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu),分化程度均與原發(fā)腫瘤一致；染色體眾數(shù)為65；細(xì)胞群體倍增時(shí)間為38.2h；細(xì)胞周期分析：G1期62.7％,G2期11.2％,S1期25.3％,；軟瓊脂集落形成率為70％；當(dāng)?shù)抖骨虻鞍譇濃度為12.5μg/ml時(shí),細(xì)胞即發(fā)生明顯凝集；病理學(xué)檢查具有腎透明細(xì)胞