人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性研究.pdf

1、目的：選擇對(duì)非小細(xì)胞肺癌一線化療藥物吉西他濱敏感的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系，以吉西他濱為誘導(dǎo)藥物，初步探討不同誘導(dǎo)方法對(duì)人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系建立的影響、人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系的生物學(xué)特性以及人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系敏感藥物對(duì)其的作用。 方法：以目前常用的兩種誘導(dǎo)方法“高濃度間歇誘導(dǎo)"和“藥物濃度遞增誘導(dǎo)”為依據(jù)，模仿臨床用藥方式，設(shè)計(jì)了“吉西他濱臨床血漿峰濃度間歇誘導(dǎo)”、“吉西他濱2／3臨床血漿峰濃度間

2、歇誘導(dǎo)”、“吉西他濱臨床血漿峰濃度沖擊與逐步增加劑量相結(jié)合誘導(dǎo)”和“吉西他濱2／3臨床血漿峰濃度沖擊與逐步增加劑量相結(jié)合誘導(dǎo)”4種誘導(dǎo)方法；根據(jù)MTT法檢測(cè)結(jié)果，從不同病理類型人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中篩選出吉西他濱敏感細(xì)胞系人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和人肺大細(xì)胞癌細(xì)胞系NCI-H460，以非小細(xì)胞肺癌的一線化療藥物吉西他濱為誘導(dǎo)藥物，采用如上所述4種方法進(jìn)行誘導(dǎo)，在誘導(dǎo)的不同時(shí)間段觀察其形態(tài)學(xué)特征、耐藥指數(shù)、耐藥譜、生長(zhǎng)曲線及倍增時(shí)間、細(xì)胞周

3、期和DNA含量等指標(biāo)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，初步判定4種誘導(dǎo)方法對(duì)人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系建立的影響；在此過程中，還檢測(cè)了其非小細(xì)胞肺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)情況，并分別從DNA、mRNA和蛋白水平研究其生物學(xué)特性；最后，從人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系的耐藥譜中選擇敏感藥物初步研究其對(duì)人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系生物學(xué)特性的作用。 結(jié)果：成功建立了人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系A(chǔ)549／Gcm(包括A5491．1／G

4、em、A5491-2/Gem、A5492_l／Gem和H4602_2／Gem)和H460／Gem(包括H4601_2／Gem、H4602-l／Gem和H4602_2／Gem)，其耐藥指數(shù)依次為38．277、7．263、115．297、25．679、L644、129．783、8．695。倒置光學(xué)顯微鏡下可見：A549細(xì)胞呈梭形，大小一致；NCI-H460細(xì)胞呈多邊形，大小一致；而產(chǎn)生耐藥性的細(xì)胞形態(tài)各異，大小不一，且體積明顯增大，透光性減

5、弱。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，耐藥細(xì)胞系均產(chǎn)生了不同范圍、不同程度的多藥耐藥性，其生物學(xué)特性差別較大，泰素對(duì)A5492_l／Gem的耐藥特性具有一定逆轉(zhuǎn)作用。 結(jié)論：能否成功建立穩(wěn)定的人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系與細(xì)胞本來的生物學(xué)特性、誘導(dǎo)方法等多種因素有關(guān)；“臨床血漿峰濃度沖擊與逐步增加劑量相結(jié)合誘導(dǎo)”更易使其快速獲得較高的耐藥性；人非小細(xì)胞肺癌多藥耐藥細(xì)胞系的耐藥譜與其親代細(xì)胞、誘導(dǎo)方法、誘導(dǎo)藥物等多種因素有關(guān)。本研究以不同病理類