大黃魚腎組織細胞系PCK的建立及其生物學特性.pdf

1、該研究從大黃魚的體細胞的原代培養(yǎng)入手,建立大黃魚體細胞系,以圖為大黃魚養(yǎng)殖業(yè)中業(yè)已存在的種質(zhì)、病害等問題的解決提供有效的技術(shù)手段采用健康的二齡大黃魚,參照左文功等方法進行原代培養(yǎng):通過比較不同取材部位、取材方法、消化時間、血清等級及份數(shù)對原代培養(yǎng)結(jié)果的影響,試圖建立適于該實驗室的海水魚細胞原代培養(yǎng)方法.按常規(guī)方法進行傳代培養(yǎng),建立穩(wěn)定的細胞系,參照陳容敏等方法對所建腎組織細胞系進行生物學特性研究;并研究了不同血清份數(shù)對該細胞系生長的影響

2、.參照Alva..MC尤峰等方法進行染色體的制備:參照張念慈等方法進行細胞保存的研究.結(jié)果表明:(1)體細胞的原代培養(yǎng).通過對二齡大黃魚進行原代培養(yǎng)實驗,成功獲得大黃魚的吻端、腎臟、肝臟及背鰭的原代細胞、肝組織原代細胞培養(yǎng)方法是消化法,0.25%胰蛋白酶消化70min,M199培養(yǎng)基+20%FBS或NBS.腎組織細胞原代培養(yǎng)方法是組織塊法或消化法,0.25%胰蛋白酶消化70min,M199培養(yǎng)基+20%FBS或NBS.吻端、鰭、鰓等組織

3、細胞的原代培養(yǎng)方法是組織塊法,M199+20%NBS或FBS.(2)大黃魚腎細胞經(jīng)過18個月傳75代,建立穩(wěn)定的成纖維樣細胞大黃魚腎細胞系,命名為PCK該細胞系適合在含5%~10%的新生牛血清(NBS)的M199培意養(yǎng)基中生長,適生長溫度20~30℃,pH6.5~7.2,平均傳代間隔時間為3d.(3)PCK細胞系為成纖維樣細胞系:可以適于5-10%的NBS培養(yǎng):最適宜溫度范圍在25~28℃:62代PCK細胞的倍增時間為55.7h;低溫保

4、存的程序為4 ℃平衡1h,70℃過夜,液氮口過渡后投入液氮;第11代細胞染色體數(shù)目變化范圍在31~55之間,模式染色體數(shù)為18,屬正常二倍體.63代PCK細胞染色體數(shù)目在32~86之間,正常染色體(2n=48)占統(tǒng)計量的14%,為異倍體細胞系.中國的細胞培養(yǎng)工作自張念慈等報導了中國第一株魚類細胞株的建立以后有了快速的發(fā)展,但主要工作還集中于淡水魚的研究,而海水魚的細胞培養(yǎng)鮮有報導.近年來隨著海水養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展,對海水魚細胞培養(yǎng)工作產(chǎn)生