一株新的水稻植物內(nèi)生固氮細(xì)菌Delftia tsuruhatensis HR4的鑒定及其生物學(xué)特性.pdf

1、該文鑒定了從水稻根面分離的一個(gè)植物內(nèi)生固氮新菌株Delftia tsuruhatensis HR4,并對(duì)其在系統(tǒng)發(fā)育上的地位和生物學(xué)特性進(jìn)行了的研究.對(duì)HR4進(jìn)行了形態(tài)特征和生理生化特性鑒定,PCR擴(kuò)增了16S rDNA全序列共1498 bp并進(jìn)行了系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析.篩選了HR4利福平突變株HR4A和HR4B,并對(duì)其進(jìn)行了gfp基因標(biāo)記.標(biāo)記菌株HR4A::gfp同野生型菌株相比,其生長(zhǎng)只受到較小的影響,并且有較高的標(biāo)記穩(wěn)定性.激光共聚焦

2、顯微鏡觀察了HR4A::gfp在水稻根部的定殖,發(fā)現(xiàn)幼根伸長(zhǎng)區(qū)和側(cè)根發(fā)生處是其侵染和定殖的重要部位,從而證明HR4是一株兼性植物內(nèi)生細(xì)菌.HR4具有較廣的拮抗譜,對(duì)實(shí)驗(yàn)的14株植物病原菌,尤其是水稻三大病害病原菌(稻瘟病菌、白葉枯病菌和紋枯病菌)都表現(xiàn)出了較強(qiáng)的平板拮抗活性.但對(duì)黃瓜黑星病原菌、黃瓜枯萎病原菌、辣椒疫霉病原菌和辣椒立枯病原菌的溫室生防功能比較低,還有待于進(jìn)一步的研究.用地高辛標(biāo)記的nifHDK探針進(jìn)行的斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)將HR

3、4的固氮酶基因定位于染色體DNA上.PCR擴(kuò)增了全長(zhǎng)3 715 bp的部分固氮酶結(jié)構(gòu)基因,得到nifD基因的完整序列、nifH和nifK基因的部分序列以及nifH-nifD的IGS和nifD-nifK的IGS序列.氨基酸序列系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析表明固氮酶具有很強(qiáng)的保守性,與HR4親緣關(guān)系最近的是Klebsiella pneumoniae.該文還首次將非培養(yǎng)方法(變性梯度凝膠電泳,DGGE)應(yīng)用于水稻植物內(nèi)生細(xì)菌研究,進(jìn)行了初步的探索.該文是第