Delftia tsuruhatensis MTQ3及其tetR缺失突變株的轉錄組分析.pdf

1、本研究以在煙草根際土壤中篩選到的Delftia tsuruhatensis MTQ3為研究對象,進行MTQ3拮抗分子機制的相關研究。
　　應用三親本雜交的方法驗證了調(diào)控tetR基因和MTQ3拮抗作用相關。將帶有tetR基因的重組質粒PBR322-T導入突變株MTQ3-ΔT,獲得重組菌株MTQ3-ΔT-P。采用對峙平板法,檢測MTQ3、MTQ3-ΔT、MTQ3-ΔT-P的拮抗能力。對MTQ3進行了抑菌驗證,并將MTQ3培養(yǎng)基進行了優(yōu)

2、化,使MTQ3在煙草青枯病病原菌平板上產(chǎn)生的抑菌圈最大,同時測定了MTQ3生長曲線。結果表明,MTQ3-ΔT-P完全恢復了拮抗能力,證實了tetR基因與MTQ3的拮抗性能有關,MTQ3對煙草青枯病病原菌具有穩(wěn)定的拮抗能力,得到了MTQ3最優(yōu)培養(yǎng)基的配方。
　　基于Illumina HiSeq 2000測序平臺,對野生菌株MTQ3和突變菌株MTQ3-ΔT進行轉錄組測序,最終得到了6294個Unigene。通過在數(shù)據(jù)庫中比對分析,得到

3、了差異顯著的1428個Unigene。其中,突變菌株相對于野生菌株上調(diào)的差異基因有290個,下調(diào)的差異基因有1138個。發(fā)現(xiàn)了一些和NRPS合成相關的基因簇。在Pathway的富集結果中,發(fā)現(xiàn)將野生菌株MTQ3插入轉座子突變之后,與CoA合成、氨基酸合成和脂肪酸合成相關基因普遍下調(diào)。所以我們推測調(diào)控基因tetR直接或間接調(diào)控產(chǎn)生的物質可能為脂肽類抗生素,脂肽的肽骨架可能是NRPS途徑合成的,我們接下來會對相關基因進行進一步的功能驗證。<