一株O型口蹄疫弱毒株的構(gòu)建與生物學(xué)特性測(cè)定.pdf

1、口蹄疫（Foot-and-Mouth Disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus，F(xiàn)MDV)引起的烈性傳染病，主要感染牛、羊、豬等家畜。在當(dāng)前FMD流行的國(guó)家和地區(qū)，滅活疫苗在疫情防控中仍發(fā)揮著重要作用。FMD滅活疫苗的生產(chǎn)必須在生物安全三級(jí)以上的車(chē)間進(jìn)行，疫苗生產(chǎn)車(chē)間必須有高度安全的防泄漏系統(tǒng)，以防止病毒泄漏、擴(kuò)散引起疫病暴發(fā)。盡管如此，因生產(chǎn)用強(qiáng)毒的泄露而導(dǎo)致的FMD暴發(fā)時(shí)有發(fā)生

2、，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，在沒(méi)有安全、有效的FMD新型疫苗的情況下，在滅活疫苗生產(chǎn)中減少或停止使用強(qiáng)毒，尋求使用中等毒力或者弱毒力種毒替換強(qiáng)毒進(jìn)行生產(chǎn)，才能從根本上解決潛在的散毒危機(jī)。
　　 本研究在實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的缺失毒力蛋白Lpro、刪除結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2和VP3并插入多克隆位點(diǎn)SspI和SgrAI的載體上，插入O型FMD疫苗種毒豬源泛亞毒株的結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2和VP3編碼序列，構(gòu)建感染性克隆，并成功拯救出嵌合弱毒

3、v4-LL，進(jìn)而研究測(cè)定了該病毒的生物學(xué)特性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)v4-LL能夠在貼壁和懸浮細(xì)胞中有效增殖;具有與強(qiáng)毒相同的乳鼠致病力;能導(dǎo)致豚鼠發(fā)病，但癥狀輕微;使用107LD50病毒量接種豬后，豬沒(méi)有出現(xiàn)典型的FMD癥狀。結(jié)果證明v4-LL具有良好的細(xì)胞培養(yǎng)增殖能力，對(duì)乳鼠的致病力與強(qiáng)毒相當(dāng)，對(duì)豚鼠的致病力低，對(duì)豬無(wú)明顯致病力。這為使用該嵌合弱毒作為FMD安全制苗種毒的可行性提供了基礎(chǔ)試驗(yàn)數(shù)據(jù)，為使用該弱毒載體系統(tǒng)制備FMD安全種毒做了鋪墊，探