IBV分子流行病學及TWI型毒株的生物學特征與傳代致弱.pdf

1、禽傳染性支氣管炎（IB）是由禽傳染性支氣管炎病毒（IBV）引起的雞的一種急性、高度接觸傳染性疾病。20世紀90年代以來，IB在國內(nèi)相繼爆發(fā)，流行十分廣泛，給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失。IBV防控的難點在于血清型、基因型眾多，且不同血清型、基因型間沒有交叉保護或者交叉保護很弱，長期的流行病學監(jiān)控及選擇針對本地區(qū)流行毒株的疫苗對 IB的防控具有重要的意義。
　　本實驗室于2013-2015年期間從我國13個省市自治區(qū)發(fā)病雞場送檢病料中分離

2、鑒定了290株IBV，并對分離株進行S1基因測序與分析，結(jié)果表明290株中除2株為變異株外，288株聚類與7個進化分支，即7個基因型。QX型和TW I型是我國目前主要的兩種 IBV優(yōu)勢基因型，分別占分離毒株的44％和26.4%；其他五個基因型4/91型、CH III型、CH IV型、CH VI型和Mass型分別占13%、5.8%、1.7%、3.7%和4.4%?；蛳嗨菩苑治霭l(fā)現(xiàn)，290株分離株之間核苷酸相似性在63.1%-100%之間，

3、氨基酸相似性在60.2%-100%。TW I型分離株與國內(nèi)常用疫苗株（Mass型、LDT3-A株、4/91株、YX10-D90株）S1基因相似性較低。重組分析發(fā)現(xiàn)，分離株中存在大量重組毒株，形成新的亞分支、亞型和變異株。
　　TW I型IBV于20世紀90年代后首先出現(xiàn)在我國臺灣地區(qū)，近幾年大陸地區(qū)TW I型分離株報道逐漸增多，但是對其生物學特征還不清楚。本研究選擇4株大陸TW I型分離株（ZS13、GZ14、ZZ15和 LYG1

4、5株）進行研究，進行分離鑒定、全基因測序與分析、血清中和實驗及商用疫苗免疫保護試驗，并建立了qPCR檢測方法。研究發(fā)現(xiàn)4株TW I型毒株僅在S1基因與臺灣TW I型參考毒株序列相似度高，其他各基因及全基因與國內(nèi)參考毒株相似度高，與臺灣地區(qū)、國外參考毒株基因相似度低。全基因重組分析表明GZ14株并不是完全來源于臺灣TW I型毒株，而是臺灣TW I型分離株與大陸毒株重組產(chǎn)生。血清中和試驗表明ZS13株、GZ14株與國內(nèi)常用疫苗株血清型不同，

5、ZS13株與GZ14株為同一血清型。商用疫苗免疫保護試驗表明目前國內(nèi)商用疫苗毒株對TW I型毒株的保護效果不佳。
　　本研究采用37℃ SPF雞胚傳代的方法對GZ14株進行致弱，以期獲得一株疫苗候選毒株。經(jīng)過一系列連續(xù)傳代，GZ14株傳代毒已適應(yīng)雞胚，造成明顯的雞胚病變，病毒滴度穩(wěn)定。致弱評價試驗發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)5、F60代對雛雞有較強致病力，而F80、F100代已對雛雞沒有致病力，接種后排毒時間縮短，在腎臟、氣管中的病毒載量顯著低于接種