山東省豬瘟流行病學(xué)調(diào)查及流行毒株Erns基因變異分析.pdf

1、豬瘟是由豬瘟病毒(CSFV)引起的豬的一種熱性、全身性出血、敗血性傳染病，以很強(qiáng)的傳染性和高致死率為特征，不同品種、年齡、性別的豬均易感。豬瘟的流行給養(yǎng)豬業(yè)造成慘重的經(jīng)濟(jì)損失。近年來豬瘟免疫失敗的報(bào)道較多，也出現(xiàn)了一些新的流行特點(diǎn)，造成這種結(jié)果的原因是多方面的，其中豬瘟病毒變異也可能是原因之一。因此，開展豬瘟流行病學(xué)調(diào)查，掌握豬瘟的流行規(guī)律及病毒變異情況，加強(qiáng)豬瘟防控相關(guān)技術(shù)研究具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　 本研究首先在山東省

2、開展豬群健康狀況調(diào)查的基礎(chǔ)上，采取問卷調(diào)查、現(xiàn)場(chǎng)臨床調(diào)查、病例剖檢、免疫抗體檢測(cè)等方法，對(duì)山東17個(gè)市50個(gè)縣（市、區(qū)）的144個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的豬瘟(CSF)感染情況進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。在144份問卷中，共調(diào)查種豬場(chǎng)33個(gè)，規(guī)模場(chǎng)50個(gè)，散養(yǎng)戶61個(gè)，部分養(yǎng)豬場(chǎng)存在著母豬流產(chǎn)、死胎、仔豬成活率低等現(xiàn)象，對(duì)242個(gè)場(chǎng)點(diǎn)采集的11241份血清樣品進(jìn)行豬瘟免疫抗體檢測(cè)，樣品抗體合格數(shù)為6379份，抗體合格率為56.75％。通過現(xiàn)場(chǎng)臨床調(diào)查和查看山東省

3、70個(gè)獸醫(yī)門診剖檢診斷記錄，發(fā)現(xiàn)2011年5月-2012年8月，診斷疑似豬瘟病例累計(jì)達(dá)93例，進(jìn)一步證實(shí)了CSF的存在，說明了CSF仍然是危害山東養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要?jiǎng)游镆卟≈?，?yīng)加強(qiáng)對(duì)該病的防控工作。
　　 利用IDEXX公司的豬瘟抗體、抗原檢測(cè)試劑盒對(duì)2011年7月至2012年1月來自山東省不同地區(qū)的16個(gè)規(guī)模化免疫豬場(chǎng)的豬群做了免疫抗體和病毒感染抗原檢測(cè)，其中對(duì)此16個(gè)豬場(chǎng)共1080份血清進(jìn)行了抗體水平檢測(cè)，另對(duì)這16個(gè)豬場(chǎng)

4、中免疫狀況較差的6個(gè)豬場(chǎng)的363份血清進(jìn)行了抗原檢測(cè)，結(jié)果抗體陽性率在43.28％-87.75％之間，抗原陽性率在0％-4.48％之間，說明所檢測(cè)的種豬場(chǎng)豬瘟免疫水平參差不齊，部分種豬場(chǎng)免疫效果較差，達(dá)不到理想的保護(hù)率，同時(shí)證實(shí)部分免疫豬群存在豬瘟帶毒現(xiàn)象。
　　 我們從上述免疫水平較低的豬場(chǎng)中送檢的13份病料進(jìn)行了RT-PCR檢測(cè)，共鑒定出8份病料豬瘟陽性，將病料處理后接種PK-15細(xì)胞，成功分離到8株豬瘟病毒，分別命名為SD

5、WF、SDTA、SDCQ、SDDY、SDWH、SDZB、SDLC和SDZZ，對(duì)這8株豬瘟毒株經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)，證明均為流行野毒株，從而進(jìn)一步證實(shí)免疫豬場(chǎng)的確存在豬瘟帶毒現(xiàn)象，因此在實(shí)際生產(chǎn)中，應(yīng)對(duì)豬群的豬瘟抗體水平進(jìn)行定期監(jiān)測(cè)，科學(xué)免疫，使豬瘟抗體保持在較高水平，以防止野毒的入侵。
　　 利用分子生物學(xué)技術(shù)，我們對(duì)已分離的8株豬瘟毒株進(jìn)行Erns基因編碼序列的擴(kuò)增、克隆并測(cè)序，利用DNAstar軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果和推斷的蛋白序列與

6、Shimen株、HCLV株，Paderborn株等28株經(jīng)典豬瘟毒株進(jìn)行比對(duì)和變異分析，8個(gè)毒株和其他12個(gè)參考毒株的氨基酸序列，Erns具有兩個(gè)保守區(qū)(CRs)，分別位于aa28-36和75-82區(qū)域。流行毒株與疫苗株在CR1區(qū)域存在差異，位于36位點(diǎn)的氨基酸E被G所取代。序列中位于30和79位的H（組氨酸）為Rnase催化活性關(guān)鍵氨基酸殘基，此位點(diǎn)高度保守。結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離毒株Erns基因之間的無論核苷酸同源性還是蛋白質(zhì)同源性都很高。這