廣西PRRSV地方流行毒株分子流行病學(xué)調(diào)查及不同豬群中PRRSV抗體檢測分析.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)作為一種高度接觸性傳染病，其病毒高度的變異是豬繁殖與呼吸綜合征免疫防控失敗的主要制約因素。結(jié)構(gòu)蛋白ORF5和非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp2基因是進行PRRSV分子流行病學(xué)研究和病毒遺傳變異分析的靶基因，對研究藍耳病毒的ORF5和Nsp2基因有著十分重要的意義。本研究對2012～2015年間送檢的樣品進行檢測分析，通過對ORF5和Nsp2基因序列測定和分析，以及不同豬群中PRRSV抗體水平檢測分析，進一步了解廣西近年來P

2、RRSV的流行趨勢及變異情況，為該病的綜合防控提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。
　　(1)本研究通過RT-PCR方法，對疑似感染PRRSV樣品進行病原檢查分析，共檢測到91份陽性樣品，陽性率為18.13％。對所獲陽性樣品進行PRRSV特異性片段擴增，獲得18條Nsp2基因序列和48條ORF5基因序列。Nsp2基因序列分析結(jié)果顯示:18個Nsp2基因與NCBI所收錄的部分參考毒株相應(yīng)核苷酸序列及其推導(dǎo)氨基酸同源性為51.9～99.1％和30

3、.4～98.7％。所獲Nsp2推導(dǎo)氨基酸與JXA1株的同源性最高。48個ORF5基因NCBI部分參考毒株相應(yīng)核苷酸及推導(dǎo)氨基酸的同源性為61.8～99.7％和52.7～99.0％。以O(shè)RF5基因為主，結(jié)合Nsp2基因進行遺傳進化分析，結(jié)果表明廣西流行的PRRSV毒株分屬于美洲型的2個亞群，主要是以JXA1為代表的Ⅳ亞群以及少數(shù)以HB-1(sh)/2002株為代表的Ⅲ亞群。
　　氨基酸序列分些結(jié)果表明，所獲得的18個Nsp2基因中有

4、15個存在與JXA1株一樣位置的30個不連續(xù)氨基酸的缺失。與VR-2332毒株相比，ORF5編碼的GP5蛋白中出現(xiàn)大量氨基酸的突變，特別是在B細胞表位的中和抗原表位(PNE)、T細胞表位以及潛在糖基化位點。與廣西過去10年NCBI所收錄部分參考毒株（89株）相比，自2012年以來，氨基酸位點突變率明顯提高，主要集中在氨基酸位點R151K(18/48，突變率37.5％);E170Q(14/48，突變率29.17％);V185A(48/48

5、，突變率100％);Q196R/L（33/48，突變率68.75％）。而與之相比，參考毒株89株中發(fā)生突變的氨基酸R151→K151(2/89，突變率為2.24％); E170Q(9/89，突變率10.11％);V185A(63/89，突變率70.78％);Q196R/L（7/89，突變率7.86％）。推測這些位點的突變將是今后廣西流行毒株突變的一個趨勢。且這些突變導(dǎo)致的蛋白內(nèi)在結(jié)構(gòu)變化、糖基位點的缺失可能會影響中和抗體產(chǎn)生的速度與數(shù)量

6、。結(jié)合進化樹分析結(jié)果，親緣關(guān)系與NCDA30毒株最近的三個毒株GXBS120815、GXYL130617、GXYL130624氨基酸位點151、170、189、191、192等突變方向與NADC30株的突變方向一致，表明廣西存在NADC30-like毒株流行，推測可能與NADC30株來源于同一株，且特定位點突變方向可以作為參考毒株是否與NCDA30毒株源于同一毒株的參考性指標。
　　(2)為研究免疫壓力下PRRSV免疫情況，對廣西

7、某地區(qū)2014～2015年春秋兩季在養(yǎng)殖場、散養(yǎng)戶、屠宰場等采集的2228份血清進行PRRSV抗體及部分樣品病原檢測。依據(jù)豬群養(yǎng)殖規(guī)模及來源分類，本研究獲得PRRSV抗體陽性樣品為1698份，陽性率為76.21％，S/P值＞2.5的比例占8.66％;規(guī)模種豬場及500頭以上的規(guī)模養(yǎng)殖場，陽性率最高達92.5％，S/P值＞2.5的最低比例為2.03％。散養(yǎng)戶抗體合格率最低，陽性率為51.31～68.42％，免疫效果最差，S/P值＞2.5的

8、比例高達16.28％。研究表明某地區(qū)種豬場及中大型規(guī)模養(yǎng)殖場豬群比較穩(wěn)定，免疫效果最好，而散養(yǎng)戶豬群免疫效果最差且不穩(wěn)定，存在野毒感染的風(fēng)險。
　　依據(jù)豬群年齡、性別、用途分類，采集2228份的血清進行PRRSV抗體，結(jié)果獲得PRRSV抗體陽性樣品為1648份，陽性率為73.97％，S/P值＞2.5比例為8.59％。豬群公豬的免疫效果最好，陽性率83.33～94.44％，S/P值在1.38～1.44，S/P值＞2.5最高比例2.3

9、2％。保育豬抗體陽性率為66.07～70.05％，S/P值＞2.5比例最低為13.53％。數(shù)據(jù)分析表明種豬群處于最穩(wěn)定狀態(tài)，不同群體之間抗體水平參差不齊，整體豬群雖較為穩(wěn)定，但野毒感染風(fēng)險較大。
　　分析不同疫苗廠家免疫PRRSV抗體情況表明，不同廠家疫苗免疫效果差異顯著，2014～2015年政府采購疫苗抗體陽性率分別為71.81～82.32％，73.15～88.55％，總陽性率為79.27％。非政府采購疫苗抗體陽性率分別為79.

10、22％～89.91％，83.11～91.60％，總陽性率為83.17％。2014～2015年弱毒疫苗抗體陽性率85.4％，87.23％，滅活苗抗體陽性率73.33％，76.68％，PRRS弱毒疫苗免疫效果要優(yōu)于滅活疫苗。
　　此外，對廣西某地區(qū)送檢的55份樣品中，獲得11條ORF5基因序列，序列同源性及遺傳進化分析表明，11株均為美洲型毒株，與JXA1株同源性最高，提示某地區(qū)主要以JXA1株為代表的高致病性藍耳病的Ⅳ亞群，及僅少數(shù)