河南省PRRSV分子流行病學(xué)調(diào)查及體外抗病毒中藥單體的篩選.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種豬的急性高度接觸性傳染病。目前主要依靠接種疫苗來對該病進行預(yù)防，尚無有效的治療藥物。且近年來，變異的 PRRSV毒株不斷出現(xiàn)，給 PRRS的預(yù)防和治療帶來了更大的困難。因此，對 PRRSV變異情況的實地實時監(jiān)控及找到有效治療藥物成為防治PRRS的重中之重。
　　本研究收集河南省部分地區(qū)的82份陽性PRRS病料，應(yīng)用RT-PCR方法分別擴增其 PRRSV

2、的 ORF5全基因和 Nsp2部分基因，進行測序比對分析，尋找PRRSV毒株的變異特點。結(jié)果表明：82份陽性病料的 ORF5基因核酸序列間同源性為94.2％～100%；與美洲型株 VR-2332、國內(nèi)變異株 JXA1及歐洲型株 LV的同源性分別為86.9%～89.7%，95.7%～99.7%及60.8%～66.3%。所擴增的Nsp2基因與VR-2332的相比均存在著兩個位點、90個堿基的缺失，提示河南省新近流行毒株基本均為高致病性 PR

3、RSV。本研究對河南地區(qū)新近流行的 PRRSV毒株的 ORF5和 Nsp2基因的變異情況進行了調(diào)查監(jiān)測，為 PRRS區(qū)域性防控措施的制定與實施提供了理論基礎(chǔ)。
　　為科學(xué)地找尋對 PRRSV有效的中藥單體及其有效濃度，本研究選擇了十味中藥單體在體外（Marc-145細胞上）以三種方式，即先給藥再接毒（阻斷吸附）、先接毒再給藥（抑制復(fù)制）和先將毒和藥作用再作用細胞（直接殺滅）進行抗病毒研究，以 CPE、病毒滴度、MTT法測得的 OD

4、值為監(jiān)測指標來評價藥物抗 PRRSV的效果。
　　結(jié)果顯示：該實驗毒株的 TCID50為10-5.5,初篩出的有效中藥單體有四種：綠原酸、黃芩苷、奎寧酸和連翹苷。它們對 Marc-145細胞的安全濃度分別是160μM，20μM，3000μM，100μM。對 PRRSV都有很好的阻斷吸附效果（保護率均在50%以上）；100μM的綠原酸和連翹苷抑制PRRSV復(fù)制的作用明顯；奎寧酸、綠原酸和連翹苷對 PRRSV有較好的直接殺滅效果。綜合