3株禽2型副黏病毒的分離鑒定與生物學(xué)特性初步分析.pdf

1、副黏病毒是在人和動(dòng)物中廣泛存在的一類病毒，其中的一些成員可以引起人和動(dòng)物的嚴(yán)重發(fā)病，造成嚴(yán)重的公共衛(wèi)生事件及重大的經(jīng)濟(jì)損失。2013年，在黑龍江省開展的野鳥中禽流感病毒的監(jiān)測(cè)中，我們?cè)诖笈d安嶺及綏棱兩個(gè)地區(qū)的野鳥樣品中發(fā)現(xiàn)了3個(gè)有血凝活性，卻不含禽流感和新城疫病毒的樣品，為鑒定這些樣品中可能存在的病原，我們開展了以下實(shí)驗(yàn):
　　首先，收集3個(gè)樣品尿囊液及利用差速離心法處理后，分別取出100μL制各電子顯微鏡負(fù)染色樣品并在電鏡下觀察

2、。在這3個(gè)樣品中均觀察到副黏病毒樣粒子:直徑為150～200nm，有囊膜且可見線性核酸。隨后，分別提取了這些樣品的核酸，利用隨機(jī)引物對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增并測(cè)序，分析結(jié)果顯示3個(gè)樣品均含與禽2型副黏病毒基因組片段有較高的相似性(71～92％)的基因片段，表明3個(gè)樣品中所含的病毒粒子與禽2型副黏病毒存在同源性。為進(jìn)一步鑒定這些病毒，我們將3個(gè)樣品并分別與NDV和APMV-2多克隆抗體進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)，結(jié)果表明NDV陽性血清對(duì)3個(gè)病毒有低的抑制活性(

3、23)而APMV-2多克隆抗體對(duì)3個(gè)抗原物質(zhì)有較高的血凝抑制活性(29)。通過以上實(shí)驗(yàn)，我們初步鑒定這3株病毒為禽2型副黏病毒，并分別命名為APMV-2/Emberiza spodocephala/China/Daxing'anling/974/2013(APMV-2/Daxing'anling/974),APMV-2/Procarduelis nipalensis/China/Suiling/53/2013(APMV-2/Suilin

4、g/53)，及APMV-2/Anthusrufulus/China/Suiling/106/2013(APMV-2/Suiling/106)。
　　由于我國還沒有有關(guān)野鳥中禽2型副黏病毒的報(bào)道，我們對(duì)這3株病毒的全基因組進(jìn)行了測(cè)定。根據(jù)GenBank中下載的2型副黏病毒的基因組序列及隨機(jī)擴(kuò)增的結(jié)果，設(shè)計(jì)了對(duì)這3株病毒全基因組測(cè)序的引物，對(duì)其基因組序列進(jìn)行了測(cè)定。測(cè)序結(jié)果表明3株病毒基因組序列全長均為15000 nt，按照5'-N-

5、P-M-F-HN-L-3'順序編碼六個(gè)非重疊基因，基因組全長遵循“六拷貝原則”。這3株分離株的全基因組序列與其他禽2型副黏病毒的基因組序列相似性為75.8～80.2％，與APMV-2/Bangor相似性最高，基因3'端存在55ntleader，5'端存在161 nt的trailer。3株病毒的P基因均存在mRNA編輯位點(diǎn)“A5G4”，通過mRNA編輯時(shí)在編輯位點(diǎn)G序列中插入1個(gè)G產(chǎn)生V蛋白或插入2個(gè)G從而產(chǎn)生W蛋白。三株病毒的N、P、M

6、、F、L基因與其它6株2型副黏病毒(NK、F8、Yucaipa、England、Kenya、Bangor)的相應(yīng)基因相似性最高的是Bangor，而HN基因相似性最高的是Kenya。將這3株病毒全基因組與本科中其它屬代表毒株全基因組進(jìn)行進(jìn)化樹分析顯示此3株病毒與其它已知的6株病毒在進(jìn)化上處于同一分支。
　　為評(píng)估這3株病毒的致病性，我們選擇APMV-2/Suiling/53進(jìn)行了動(dòng)物試驗(yàn)。經(jīng)測(cè)定APMV-2/Suiling/53的雞