經鴨胚傳遞的鴨副黏病毒分子生物學特性研究.pdf

1、鴨副黏病毒病(鴨源新城疫)是由鴨副黏病毒(鴨源新城疫病毒)引起的一種急性敗血性傳染病。該病以腹瀉和神經癥狀,腺胃黏膜局灶性出血或潰瘍,腸道黏膜出血及胰腺或脾臟有白色壞死點為主要特征。鴨發(fā)病日齡多集中在5—8周齡,發(fā)病率和死亡率分別可達20％-60％和10％-15％,個別鴨群兩者均高達90％以上。一般認為副黏病毒主要通過病禽的胴體、內臟、排泄物或分泌物以及污染的飼料、水源、草地、用具等經消化道、呼吸道或眼結膜進行水平傳播。2008年本實驗

2、室從表現疑似副黏病毒病癥狀的一日齡雛鴨和死亡鴨胚中分離到一株病毒,通過生物學特性試驗、RT-PCR方法擴增F基因片段確定分離毒株為副黏病毒。因此我們推測鴨副黏病毒可以經胚蛋垂直傳播。
　　 本研究對2008—2009年表現類似副黏病毒病癥狀的一日齡雛鴨和死亡鴨胚進行了副黏病毒的分離鑒定,對分離到的4株鴨副黏病毒進行了生物學特性和遺傳特性研究。致病指數MDT和ICPI測定結果分別為50.4-58.0h和1.68-1.75,表明分離

3、株均為強毒株。致病性試驗顯示,代表毒株對不同日齡雛鴨均具有較強的致病性,發(fā)病率和死亡率分別達70％-100％和20％-100％。采用RT-PCR對4株分離株F基因進行擴增和序列分析,結果表明,分離毒株間同源性在99.8％-100％,與本實驗室之前從肥城地區(qū)1日齡雛鴨中分離到的SDFCH株同源性最高為99.5％-99.8％,與其他鴨源、雞源、鵝源、鴿源NDV同源性分別為88.1％-98.4、88.4％-98.7％、88.6％-97.6％和

4、90.8％-94.8％；遺傳進化分析表明,4株鴨副黏病毒與SDFCH位于同一分支,均屬于基因Ⅶd型。分離毒株與SDFCH株間高度同源,遺傳關系高度相近,推測可能與這些毒株經鴨胚傳遞有關。
　　 根據GenBank中發(fā)表的NDV病毒全基因組序列,共設計合成了19對引物,采用RT-PCR方法對分離毒株SDWF02全基因組進行擴增和序列分析。結果表明,SDWF02全長15192bp,在NP基因5’非編碼區(qū)存在6bp插入,與GenBan

5、k上公布的NDV基因Ⅴ-Ⅶ、Ⅸ型全基因組長度相同,包含3’前導序列、5’尾隨序列和6個開放閱讀框,基因排列順序為3’-NP-P-M-F-HN—L-5’。SDWF02基因3’端前12個核苷酸與5’末端12個核苷酸互補配對,各基因起始、終止序列與其他NDV相應序列高度同源,NP—P、P-M、M-F、F-HN、HN-L各基因間區(qū)的序列長度依次為1bp、1bp、1bp、31bp和47bp。同源性分析結果表明,SDWF02與近幾年國內外分離的基因

6、Ⅶ型雞源GM、chicken/China/Guangxi9/2003、chicken/China/Guangxi11/2003,鴨源Muscovy duck/China(Fujian)/FP1/02、Laying duck/JSD0812/2008,鵝源ZJ1、SF02同源性較高,在97.0％-97.3％之間；與其他基因型NDV毒株及傳統(tǒng)Lasota、F48E9、Mukteswar等同源性較低僅為82.8％-89.1％。此外,與其他毒株