番鴨細(xì)小病毒和鴨甲肝病毒3型廣西株全基因序列分析及其分子生物學(xué)診斷方法的建立.pdf

1、番鴨細(xì)小病毒病是由番鴨細(xì)小病毒(MDPV)引起的引起的主要感染三周齡以內(nèi)雛番鴨的一種病毒性傳染病，雛鴨感染后可產(chǎn)生腸道卡他性炎癥、拉稀腹瀉、兩腳發(fā)軟等癥狀，嚴(yán)重危害了番鴨飼養(yǎng)業(yè)的發(fā)展。目前，番鴨細(xì)小病毒病在我國福建、廣東、廣西等主要番鴨飼養(yǎng)區(qū)廣泛流行。
　　鴨甲型病毒性肝炎是由鴨甲肝炎病毒(DHAV)引起的一種傳染性強(qiáng)致死率高的傳染病，主要侵害三周齡以內(nèi)雛鴨。DHAV根據(jù)血清型分為DHAV-1型、DHAV-2型和DHAV-3型，分

2、別對(duì)應(yīng)于原來的血清Ⅰ型DHV、最早發(fā)現(xiàn)于臺(tái)灣的“新型DHV”和最早發(fā)現(xiàn)于韓國的“新型DHV”。隨著我國養(yǎng)鴨業(yè)的發(fā)展，鴨肝炎的發(fā)病率和死亡率越來越高，嚴(yán)重制約了養(yǎng)鴨業(yè)的發(fā)展。近年來，在我國流行的DHAV主要為DHAV-1和DHAV-3。
　　為從分子水平上了解廣西流行株MDPV和DHAV-3的遺傳變化規(guī)律，本研究應(yīng)用PCR方法擴(kuò)增了廣西分離株MDPV GX2011-5和DHAV-3GXLZ07的不同核酸片段，對(duì)其進(jìn)行了全基因組序列測

3、定與分析。結(jié)果表明，GX2011-5全基因序列與GeneBank公布的其他MDPV株的相似性介于90.5％～94.3％之間，與上海SAAS-SHNH株的相似性最高，與匈牙利FM株的相似性為最低;與鵝細(xì)小病毒(Goose Parvovirus，GPV)的相似性介于81.4％～91.4％之間，其中與重慶DY株相似性最高，與匈牙利Virulent B株相似性最低。GXLZ07株全基因序列與DHAV-3其它毒株全基因序列相似性介于95.1～99

4、.3％之間，與福建G株相似性最高，與北京B63株相似性最低。
　　根據(jù)GenBank中鴨甲肝病毒1型(DHAV-1)的3C基因和DHAV-3的VP0基因分別設(shè)計(jì)了2對(duì)特異性引物，并優(yōu)化擴(kuò)增條件，建立了鑒別DHAV-1和DHAV-3二重二溫式RT-PCR的檢測方法。該方法特異性好，對(duì)其他鴨病原體無特異性擴(kuò)增。該方法的敏感性高，對(duì)DHAV-1的核酸最小檢測量為4.9g，對(duì)DHAV-3的為7.5ng。應(yīng)用該方法對(duì)53份疑似病料進(jìn)行檢測，

5、結(jié)果DHAV-1陽性3份，DHAV-3陽性2份，表明建立的方法適用于臨床樣品檢測的應(yīng)用。
　　根據(jù)GenBank中鴨DHAV-1的3C基因、DHAV-3的VP0基因和MDPV的NS基因分別設(shè)計(jì)了3對(duì)特異性引物，并優(yōu)化擴(kuò)增條件，建立了DHAV-1、DHAV-3和MDPV多重PCR的檢測方法。該方法特異性好，對(duì)其他鴨病原體無特異性擴(kuò)增。該方法的敏感性高，對(duì)DHAV-1的核酸最小檢測量為5.2pg，對(duì)DHAV-3的為7.9pg，對(duì)MDP