美國紅魚致病性弧菌分離鑒定與免疫防治技術研究.pdf

1、美國紅魚學名眼斑擬石首魚(Sciaenops ocelcatus)屬鱸形目、石首魚科、擬石首魚屬，為浙江、福建主要養(yǎng)殖魚類之一。近年來，隨著養(yǎng)殖集約化發(fā)展，美國紅魚病害頻繁爆發(fā)，嚴重制約著其人工養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展急需對其病害進行免疫防治技術研究。本文分析了從患潰爛癥的美國紅魚體內(nèi)分離到的優(yōu)勢菌株M-1的致病性和分類學地位，并對培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化，進一步研究了用該菌制備的滅活疫苗對美國紅魚的免疫效果，最后又對中草藥制劑對影響美

2、國紅魚免疫的機能進行了探討。獲得的結果如下： 1、從患潰爛癥的美國紅魚分離到優(yōu)勢菌株M-1，人工感染實驗證實該菌為美國紅魚的致病菌。對該細菌進行了形態(tài)學、生理生化特性分析，同時測定了菌株M-1的16S rRNA和HSP60基因序列，分析相關細菌相應序列的同源性，構建了系統(tǒng)發(fā)育樹。16S rRNA基因構建的系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，菌株M-1與燦爛弧菌(AJ874361)的親緣關系最近，具有96.1％的同源性；HSP60基因序列分析表明M-

3、1與弧菌(EU653883)聚為一個分支。綜合上述結果，可鑒定菌株M-1為燦爛弧菌，命名為燦爛弧菌M-1菌株(Vibriosplendidus M-1)。藥敏實驗證實該菌株對菌必治、復方新諾明、先鋒必等9種藥物敏感。 2、采用梯度法比較了培養(yǎng)時間、溫度、鹽度、初始pH值、菌液起始濃度等對燦爛弧菌M-1菌株生長的影響；采用正交試驗法對Zobell2216 E培養(yǎng)基組分進行了優(yōu)化。結果表明：M-1菌株產(chǎn)最大活菌數(shù)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)時

4、間48 h、溫度32℃、鹽度40、初始pH值8.0、菌液起始濃度為1×105CFU/mL；最佳培養(yǎng)基成分為：蛋白胨7.5 g/L、酵母浸出膏1.5 g/L、CuSO40.075 mg/L、CaCl20.04 g/L。 3、制備燦爛弧菌福爾馬林滅活疫苗。通過浸泡、注射和口服等3種方式接種美國紅魚，分別在接種免疫后第7、14、21、28、35 d采魚血，檢測其血清抗體效價、溶菌酶活力和白細胞吞噬活性；第28 d用1.0×108CFU

5、/mL的燦爛弧菌菌懸液進行攻毒試驗來比較疫苗的免疫效果。結果表明，各免疫組血清抗體效價在第21 d達到峰值，且浸泡組和注射組的血清抗體效價高于口服組；在35 d實驗期內(nèi)，各免疫組的血清溶菌酶活力有明顯提高，各浸泡組和注射組于免疫接種后14 d顯著高于對照組水平(P<0.05)；除浸泡組3外，其余各免疫組的白細胞吞噬百分比(PP)和吞噬指數(shù)(PI)在免疫接種后14 d均較對照組有顯著升高(P<0.05)；各組受免魚對人工攻毒均具有保護作用

6、，注射組2的免疫保護率最高達77.8％。 4、用分別含連翹、豬苓、黃芩、茯苓和黃連水提取物的配合餌料飼喂美國紅魚，研究其對美國紅魚生長和免疫機能的影響。結果表明：投喂含有黃芩和茯苓的藥餌可使美國紅魚的體長增長率和相對增重率顯著高于對照組(P<0.05)；投喂5種含中草藥的藥餌后，美國紅魚血液白細胞的吞噬活性有明顯提高，投藥后3 d，除茯苓組外，其余各組吞噬百分比(PP)比對照組極顯著升高(P<0.01)；在投藥后3 d或7 d，

7、連翹、黃芩和黃連組的吞噬指數(shù)(PI)與對照組相比有顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)升高。在停投藥餌后7 d，除茯苓組外，其余各組PP、PI與對照組相比仍有顯著差異(P<0.05)。同時，美國紅魚血清溶菌酶活性也有顯著提高，投藥后7 d，溶菌酶活性與對照組之間差異極顯著(P<0.01)，但在停投藥餌后7 d，溶菌酶活性與對照組之間無顯著差異(P>0.05)；投藥28 d后，利用哈維氏弧菌人工感染美國紅魚，黃芩組的相對免疫保護率