山東沿海分離的致病性鰻弧菌主要外膜蛋白研究.pdf

1、V9 8 9 5 0 7上分類號(hào)一⑨研究生學(xué)位論文山東沿海分離的致病性鰻弧菌主要外膜蛋白研究研究生姓名 坌位里指導(dǎo)教師姓名隧直掛熬授申請(qǐng)學(xué)位級(jí)尉 亟 土 專業(yè)名稱 瀣滋生物堂論文答辯日期2 嫂壘壘曼且至量目學(xué)位授予日期窒鯉璺生! 且中國海洋大學(xué)山東沿海分離的斂粕性鰻弧苗主要外膜坐白州究山東沿海分離的致病性鰻弧茵主要外膜蛋白研究摘要鰻弧菌( V J b r J o 月，柳，j ，l a r u n ) 是一種危害魚類的重要的條件性病原菌，

2、在世界各地流行，也是我國鱸魚、牙鲆、大菱鲆等海水養(yǎng)殖動(dòng)物的重要的病原菌，常給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成較大的危害。鰻弧菌外膜蛋白在其致病過程中也起著十分重要的作用，如細(xì)菌侵襲、粘附、毒素的分泌、鐵的攝取、抗生素抗性等方面。本文對(duì)山東沿海分離的致病性鰻弧菌主要外膜蛋白進(jìn)行了以下方面的研究：制備了鰻弧菌C W l ：C W 3 、C W 4 、C W 5 、C W 6 和T L O I 的抗血清，與鰻弧菌不同血清型的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行的微量凝集試驗(yàn)表明，鰻弧

3、菌c w l 、C W 3 、C W 5 、C W 6 屬于0 】血清型，T I 。0 1 屬于0 2 血清型，而C W 4 屬于0 3 血清型。用S a r k o s y ] 法提取分離了6 株致病性鰻弧菌和8 株不同血清型鰻弧菌標(biāo)準(zhǔn)菌株主要外膜蛋白，用S D S —P A G E 電泳分析了其主要外膜蛋白的特征，不同菌株外膜蛋白的S D S —P A G E 圖譜各不相同，但主要外膜蛋白分子量都集中在1 9 k D a 一8 3k

4、 D a 之間，各菌株含有共同的主要外膜蛋白條帶，分子量分別為2 4k D a ，3 8 k D a ，4 2 k D a 和4 7k D a ，這4 個(gè)蛋白組分占外膜蛋白總量的9 0 ％以上。用兔抗鰻弧菌C W l 抗血清對(duì)6 株鰻弧菌外膜蛋白進(jìn)行W e s t e r n l b l o t t i n g 分析表明，6 株鰻弧菌含有共同的抗原，它們的分子量分別為2 4k D a ，3 8k D a ，4 2k D a 和4 7 k

5、 D a ，其中2 4k D a 外膜蛋白與抗鰻弧菌C W l 抗血清反應(yīng)最強(qiáng)烈，分子量大于4 7 k D a 的外膜蛋白與抗C W l 抗血清反應(yīng)很弱。研究了不同培養(yǎng)溫度對(duì)鰻弧菌外膜蛋白表達(dá)的影響，當(dāng)鰻弧菌在3 7 ℃培養(yǎng)時(shí)，1 9k D a 外膜蛋白表達(dá)量明顯增加，其占總蛋白的量從2 8 ℃時(shí)的3 ％升高到4 0 ％，而4 2 k D a 和4 7k D a 外膜蛋白表達(dá)量下降：在1 5 。C 培養(yǎng)時(shí)，8 3 k D a 外膜蛋白表

6、達(dá)量f ! f j 顯增加。W e s t e r n —b l o t L in g 分析表明，細(xì)菌在1 5 ℃和3 7 ℃培養(yǎng)時(shí)的外膜蛋白抗原性反應(yīng)發(fā)生變化，其中2 4k D a 和3 8 k D a 外膜蛋白與鰻弧菌抗血清的反應(yīng)明顯減弱。研究了4 種不同類型的抗生素對(duì)鰻弧菌主要外膜蛋白表達(dá)的影響，結(jié)果表明氨芐青霉素、強(qiáng)力霉素和磺胺嘧啶能明顯抑制鰻弧菌4 2 k D a 主要外膜蛋白的表達(dá)，隨著抗生素濃度的增加，該外膜蛋白的表達(dá)量逐