副溶血弧菌對(duì)西施舌致病性及其外膜蛋白的研究.pdf

1、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus Vp)是一種革蘭氏陰性嗜鹽菌，其引起的疾病，發(fā)病率高，流行范圍廣，危害嚴(yán)重?；【『κ窍拗莆覈Ｑ篝~類貝類等海洋經(jīng)濟(jì)動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的最主要因素之一，我國對(duì)魚類的相關(guān)報(bào)道較多，但對(duì)貝類的相關(guān)報(bào)道較少。 西施舌等無脊椎動(dòng)物不能產(chǎn)生免疫球蛋白，缺乏抗體介導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)。研究表明，合適的免疫刺激劑可以增加生物機(jī)體非特異性免疫能力，提高其整體抗病機(jī)能。 外膜蛋白OMP

2、(outer membrane protein)是細(xì)菌表面的有效抗原之一，用細(xì)菌OMP制備的疫苗，可保護(hù)機(jī)體抵抗同型或異型菌的攻擊，其具有免疫原性且能誘導(dǎo)保護(hù)性免疫反應(yīng)已經(jīng)得到證實(shí)，而且利用現(xiàn)代生物技術(shù)很容易提取OMP，因此研制開發(fā)OMP疫苗具有廣闊的前景。 對(duì)細(xì)菌耐藥性的監(jiān)測(cè)和耐藥機(jī)制的研究已成為當(dāng)今十分活躍的世界性熱門課題，研究多種致病菌對(duì)抗生素的耐藥性，可為耐藥性的監(jiān)控和多種細(xì)菌病的防治提供科學(xué)依據(jù)。 鑒于此，本實(shí)

3、驗(yàn)通過副溶血弧菌對(duì)西施舌人工感染，連續(xù)觀察7d，發(fā)現(xiàn)副溶血弧菌對(duì)西施舌具有很強(qiáng)的致病性，死亡率隨感染劑量的增加而增大，外觀病理變化顯著，取患病西施舌腸道、斧足、出水管、生殖腺、外套膜做石蠟切片后觀察，各部分均出現(xiàn)了不同程度的病理特征，尤其上皮細(xì)胞變化顯著； 以十二烷基肌氨酸鈉法提取 VP-OMP，SDS-PAGE法測(cè)定其蛋白分子量，Bradford法測(cè)定OMP濃度，發(fā)現(xiàn)不同培養(yǎng)條件(溫度、pH、培養(yǎng)基)對(duì)VP-OMP有不同的影響

4、；培養(yǎng)時(shí)間對(duì)VP-OMP無影響。 用VP-OMP免疫西施舌后攻毒，連續(xù)觀察14d，測(cè)得OMP對(duì)西施舌免疫保護(hù)率高于全菌滅活苗，并且高濃度OMP免疫保護(hù)率高于低濃度OMP免疫保護(hù)率，各項(xiàng)免疫指標(biāo)(抗菌活力、溶菌活力、吞噬能力)都有不同程度的提高。 用藥敏紙片法測(cè)定了副溶血弧菌、鰻弧菌、擬態(tài)弧菌、溶藻弧菌、嗜水氣單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌7種細(xì)菌對(duì)30種抗生素的耐藥性，發(fā)現(xiàn)不同細(xì)菌對(duì)不同抗生素有不同程度的耐藥；