致病性副溶血弧菌TDH表達(dá)調(diào)控因子篩查.pdf

1、致病性副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus，Vp）是重要的食源性致病菌之一。但是，關(guān)于其主要致病因子-直接耐熱溶血毒素（Thermostable direct hemolysin，TDH）調(diào)控機(jī)制的研究報(bào)道較少。本研究以6因素5水平正交實(shí)驗(yàn)篩選提高TDH誘導(dǎo)表達(dá)的培養(yǎng)條件，并通過(guò)單因素及正交實(shí)驗(yàn)證實(shí)各因素對(duì)TDH表達(dá)的作用。本研究獲得2種可提高TDH表達(dá)的Vp培養(yǎng)基。其中，培養(yǎng)溫度、pH值、?；悄懰幔═auroch

2、olicacid，TCA）和NaCl濃度均可影響TDH的表達(dá)。
　　本研究運(yùn)用雙親本接合法，將Mini-Tn5-Km2/Cm片段隨機(jī)插入致病性Vp（ATCC33846，tdh+）基因組，構(gòu)建隨機(jī)插入突變的Vp突變體庫(kù)；以含有相應(yīng)抗生素（Km/Cm）和氨芐青霉素（Amp）的硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（Thiosulfate citrate bile salts sucrose agar，TCBS）進(jìn)行突變株（KmR/CmR

3、AmpS）篩選；并以 PCR方法對(duì)突變菌株進(jìn)行Km/Cm基因篩查，成功構(gòu)建包含490株Vp突變株的突變體庫(kù)。以我萋氏血平板篩選溶血表型變化菌株，共獲得5株溶血表型變化穩(wěn)定的菌株（2株為溶血能力上調(diào)，3株為下調(diào)）。對(duì)5株突變菌株進(jìn)行生長(zhǎng)曲線、菌膜形成能力和運(yùn)動(dòng)能力測(cè)定發(fā)現(xiàn)：2株溶血能力上調(diào)菌株及1株溶血能力下調(diào)菌株在運(yùn)動(dòng)能力、生長(zhǎng)速率和菌膜形成能力方面較親本株顯著降低（P<0.05）；另2株溶血能力下調(diào)菌株菌膜形成能力較親本株顯著提高（P