副溶血弧菌群體感應(yīng)與調(diào)控的初步研究.pdf

1、本論文研究了從羅氏沼蝦中分離的副溶血弧菌 VIB461的群體感應(yīng)(quorum sensing,QS)系統(tǒng),并探究了群體感應(yīng)抑制劑對副溶血弧菌群體感應(yīng)系統(tǒng)及群體感應(yīng)相關(guān)性狀的調(diào)控作用。
　　本論文的研究內(nèi)容主要包括以下3個部分:
　　1.副溶血弧菌群體感應(yīng)信號分子的檢測
　　本文采用報告菌株根癌農(nóng)桿菌A136和紫色桿菌CV026,結(jié)合反相C18薄層層析法檢測了副溶血弧菌 VIB461產(chǎn)生的?；呓z氨酸內(nèi)酯類信號分子(a

2、cyl-homoserine lactones,AHLs)。結(jié)果顯示VIB461能產(chǎn)生C6-HSL和C8-HSL兩種不同類型的AHLs信號分子,并且AHLs信號分子的活性隨著培養(yǎng)時間延長呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢,在對數(shù)生長末期時活性最強。同時我們還使用報告菌株哈維氏弧菌 JMH597和 JAF375檢測了 VIB461產(chǎn)生的 AI-2型信號分子(autoinducer-2,AI-2)和霍亂弧菌I類信號分子(cholerae autoin

3、ducer-l,CAI-1),結(jié)果顯示 VIB461能產(chǎn)生這兩種類型的信號分子,其中 AI-2信號分子活性在對數(shù)生長期迅速上升至較高的水平并保持至細菌生長的穩(wěn)定期,而CAI-1信號分子僅在對數(shù)生長后期至穩(wěn)定期前期表現(xiàn)出較強的活性。
　　2.副溶血弧菌LuxS/AI-2型群體感應(yīng)的研究
　　本文采用PCR擴增了副溶血弧菌VIB461的luxS基因,通過克隆測序得到了長度為388bp的有效片段,經(jīng)BLAST比對發(fā)現(xiàn)其序列與已上傳

4、的副溶血弧菌luxS基因的相似度高達98％,與其它菌luxS基因的相似度隨親緣關(guān)系變遠而逐漸降低。同時我們使用熒光定量 PCR檢測了不同生長階段和不同培養(yǎng)條件下VIB461 luxS基因的表達情況,結(jié)果顯示luxS表達量與AI-2活性基本一致,二者均受生長階段和培養(yǎng)條件的調(diào)控。luxS基因在對數(shù)生長期開始大量表達,并保持較高的轉(zhuǎn)錄水平直至細菌生長穩(wěn)定期。不同溫度、pH和鹽度對 VIB461的 luxS基因表達和AI-2活性均有影響。當溫

5、度、pH和鹽度在一定程度上偏離最適生長條件時,luxS表達量和AI-2活性均有不同程度升高,但在高溫條件下兩者均有所降低。
　　3.群體感應(yīng)抑制劑對副溶血弧菌群體感應(yīng)及相關(guān)性狀的調(diào)控
　　本文通過報告菌株哈維氏弧菌 JMH597檢測了群體感應(yīng)抑制劑溴化呋喃酮抑制群體感應(yīng)的效果及有效濃度范圍,結(jié)果顯示2 mg/L及以上濃度的溴化呋喃酮均對JMH597的熒光有抑制作用,表明該溴化呋喃酮有較強的抑制群體感應(yīng)的活性。溴化呋喃酮對副溶

6、血弧菌VIB461的最小抑菌濃度為20 mg/L。我們研究了亞抑菌濃度的溴化呋喃酮對VIB461 LuxS/AI-2型群體感應(yīng)及QS相關(guān)的生物膜和胞外酶的調(diào)控作用。結(jié)果顯示,溴化呋喃酮對 VIB461 luxS基因表達和 AI-2活性均有強烈的抑制作用,10 mg/L溴化呋喃酮對二者的抑制率均達到80%以上。溴化呋喃酮能較為有效的抑制VIB461生物膜的形成,但對其明膠酶和卵磷脂酶活性均只有一定的抑制作用,推測這些性狀除了受LuxS/A