養(yǎng)殖凡納濱對蝦病原菌(哈維氏弧菌)的分離鑒定與防治.pdf

1、本文從發(fā)病瀕死的養(yǎng)殖凡納濱對蝦(Penaeus vannamei Boone)病灶部位分離出優(yōu)勢菌株并對其致病性和分類地位進(jìn)行研究。探索飼喂不同分子量殼聚糖對凡納濱對蝦體重和非特異性免疫力影響，以及分析鹽酸恩諾沙星及其代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星在凡納濱對蝦體內(nèi)藥代動力學(xué)，為凡納濱對蝦病原菌病防治提供科學(xué)依據(jù)。結(jié)果如下：
　　 1.2009年7月，海南省瓊海市椰林村某凡納濱對蝦養(yǎng)殖場養(yǎng)殖的凡納濱對蝦發(fā)生嚴(yán)重病害，累計死亡率高。病蝦的主要癥狀

2、表現(xiàn)為步足變紅，鰓絲變黃，腹部肌肉有壞死，肝胰腺糜爛性壞死等。從病蝦肌肉中分離純化得到優(yōu)勢菌株。人工感染試驗(yàn)證實(shí)該菌株對凡納濱對蝦有較強(qiáng)的致病性，對體重為10g±1g的凡納濱對蝦的半數(shù)致死量為8.12×103cfu/mL。通過形態(tài)學(xué)和生理生化特征以及細(xì)菌16S rDNA序列研究確定，該病原菌為哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)。該菌對恩諾沙星、氯霉素、四環(huán)素、丙氟哌酸、氟哌酸及復(fù)方新諾明敏感。選用6種抗生素對所分離到的致病菌株的

3、最小抑菌濃度(MIC)試驗(yàn)表明鹽酸恩諾沙星MIC最低為0.25μg/mL。經(jīng)試驗(yàn)室注射感染試驗(yàn)蝦，通過組織病理學(xué)觀察表明，病蝦的鰓、肝胰腺、中腸、胃、圍心腔和肌肉的微觀結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯的病理變化，其中尤以肝胰腺最為嚴(yán)重，主要表現(xiàn)為細(xì)胞壞死、脫落，細(xì)胞腫脹，細(xì)胞核邊聚，線粒體腫脹、變性，嚴(yán)重時整個細(xì)胞呈溶解狀態(tài)。由此引起的機(jī)體功能衰竭可能是病蝦死亡的主要原因。
　　 2.以初始體重（5±1）g的凡納濱對蝦為研究對象，探討飼料中分別添

4、加1萬分子量殼聚糖和3萬分子量殼聚糖對其體重和非特異性免疫力的影響。對照組投喂相應(yīng)的基礎(chǔ)飼料，1萬分子量殼聚糖組試驗(yàn)飼料在其基礎(chǔ)飼料中分別添加1g/kg、3g/kg、5g/kg、10g/kg的1萬分子量殼聚糖，3萬分子量殼聚糖組試驗(yàn)飼料在其基礎(chǔ)飼料中分別添加1g/kg、3g/kg、5g/kg、10g/kg的3萬分子量殼聚糖；配制出9種基本等氮等能的實(shí)驗(yàn)飼料。實(shí)驗(yàn)在1m3的圓桶中進(jìn)行，隨機(jī)分為9組，每組90尾，試驗(yàn)期28d。飼喂7天后每個

5、桶分別隨機(jī)抽取30尾試驗(yàn)蝦測定體重并進(jìn)行所分離到的哈維氏弧菌攻毒實(shí)驗(yàn)。飼喂28天后測定試驗(yàn)蝦的體重，并分別從每個桶抽取部分試驗(yàn)蝦的血淋巴進(jìn)行血清中非特異性免疫指標(biāo)的分析，同時每個桶取30尾試驗(yàn)蝦進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，凡納濱對蝦攝食7d后各個處理間體重和抗所分離到的哈維氏弧菌的能力差異不顯著(P＞0.05)。凡納濱對蝦攝食28d后，各個處理間體重差異不顯著(P＞0.05)；各個處理間酚氧化酶活力和溶菌酶活力差異顯著(P＜0.05)，

6、超氧化物歧化酶活力差異不顯著(P＞0.05)。用所分離到的哈維氏弧菌攻毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，攝食28d后，3g/kg的1萬分子量殼聚糖組和3g/kg的3萬分子量殼聚糖組的14d累積死亡率(分別為43％和47％)顯著低于空白對照組(67％)(P＜0.05)。因此，飼料中添加適宜含量的殼聚糖能在一定程度上提高凡納濱對蝦抵抗本次分離到的哈維氏弧菌的能力，但是與殼聚糖的添加量和飼喂時間有關(guān)；同時殼聚糖對凡納濱對蝦體重沒有正面影響。
　　 3.

7、采用高效液相色譜法通過凡納濱對蝦（15±2g）口灌30mg/kg恩諾沙星研究在其體內(nèi)藥代動力學(xué)。在水溫29.5±1℃下，凡納濱對蝦口灌恩諾沙星后，血液中藥物濃度2h后到達(dá)峰值，并迅速向組織中分布，血藥經(jīng)時過程符合一級吸收二室開放模型，主要藥動學(xué)參數(shù)為：分布半衰期(t1/2α)，消除半衰期(t12β),0-t時間曲線下面積(AUC0.t),0-oo時間的曲線下面積(AUC0-∞)，一室到二室轉(zhuǎn)運(yùn)一級消除常數(shù)(K12).二室到一室轉(zhuǎn)運(yùn)一級消

8、除常數(shù)(K21)，總體清除率(CLs)分別為3.167h、37.277h、188.887mg/L·h、190.362mg/L·h、0.071/h、0.0211/h、0.158L/h/kg。肌肉和肝胰腺中恩諾沙星濃度與時間關(guān)系的藥動學(xué)參數(shù)采用統(tǒng)計矩原理分析，半衰期(t1/2z)分別為75.863h和207.592h，總體清除率(CLz)分別為0.655L/h/kg和0.043L/h/kg。在試驗(yàn)蝦血淋巴、肝胰腺和肌肉3種組織均能檢測到恩諾

9、沙星的代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星，主要參數(shù)：血藥峰濃度(Cmax)為0.451μg/mL、3.803μg/mL、0.038μg/mL。AUC為7.423mg/L·h、47.843mg/L·h、0.937mg/L·h,ti/2z為12.432h、24.647h、11.854h。給藥后15d時，血淋巴、肝胰腺和肌肉中恩諾沙星含量都已低于0.10μg/g，恩諾沙星及其代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星在凡納濱對蝦體內(nèi)消除較慢。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，預(yù)測以30mg/kg的劑量鹽