養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦病原菌(哈維氏弧菌)的分離鑒定與防治.pdf

1、本文從發(fā)病瀕死的養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦(Penaeus vannamei Boone)病灶部位分離出優(yōu)勢(shì)菌株并對(duì)其致病性和分類(lèi)地位進(jìn)行研究。探索飼喂不同分子量殼聚糖對(duì)凡納濱對(duì)蝦體重和非特異性免疫力影響，以及分析鹽酸恩諾沙星及其代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星在凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)，為凡納濱對(duì)蝦病原菌病防治提供科學(xué)依據(jù)。結(jié)果如下：
　　 1.2009年7月，海南省瓊海市椰林村某凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖的凡納濱對(duì)蝦發(fā)生嚴(yán)重病害，累計(jì)死亡率高。病蝦的主要癥狀

2、表現(xiàn)為步足變紅，鰓絲變黃，腹部肌肉有壞死，肝胰腺糜爛性壞死等。從病蝦肌肉中分離純化得到優(yōu)勢(shì)菌株。人工感染試驗(yàn)證實(shí)該菌株對(duì)凡納濱對(duì)蝦有較強(qiáng)的致病性，對(duì)體重為10g±1g的凡納濱對(duì)蝦的半數(shù)致死量為8.12×103cfu/mL。通過(guò)形態(tài)學(xué)和生理生化特征以及細(xì)菌16S rDNA序列研究確定，該病原菌為哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)。該菌對(duì)恩諾沙星、氯霉素、四環(huán)素、丙氟哌酸、氟哌酸及復(fù)方新諾明敏感。選用6種抗生素對(duì)所分離到的致病菌株的

3、最小抑菌濃度(MIC)試驗(yàn)表明鹽酸恩諾沙星MIC最低為0.25μg/mL。經(jīng)試驗(yàn)室注射感染試驗(yàn)蝦，通過(guò)組織病理學(xué)觀察表明，病蝦的鰓、肝胰腺、中腸、胃、圍心腔和肌肉的微觀結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯的病理變化，其中尤以肝胰腺最為嚴(yán)重，主要表現(xiàn)為細(xì)胞壞死、脫落，細(xì)胞腫脹，細(xì)胞核邊聚，線(xiàn)粒體腫脹、變性，嚴(yán)重時(shí)整個(gè)細(xì)胞呈溶解狀態(tài)。由此引起的機(jī)體功能衰竭可能是病蝦死亡的主要原因。
　　 2.以初始體重（5±1）g的凡納濱對(duì)蝦為研究對(duì)象，探討飼料中分別添

4、加1萬(wàn)分子量殼聚糖和3萬(wàn)分子量殼聚糖對(duì)其體重和非特異性免疫力的影響。對(duì)照組投喂相應(yīng)的基礎(chǔ)飼料，1萬(wàn)分子量殼聚糖組試驗(yàn)飼料在其基礎(chǔ)飼料中分別添加1g/kg、3g/kg、5g/kg、10g/kg的1萬(wàn)分子量殼聚糖，3萬(wàn)分子量殼聚糖組試驗(yàn)飼料在其基礎(chǔ)飼料中分別添加1g/kg、3g/kg、5g/kg、10g/kg的3萬(wàn)分子量殼聚糖；配制出9種基本等氮等能的實(shí)驗(yàn)飼料。實(shí)驗(yàn)在1m3的圓桶中進(jìn)行，隨機(jī)分為9組，每組90尾，試驗(yàn)期28d。飼喂7天后每個(gè)

5、桶分別隨機(jī)抽取30尾試驗(yàn)蝦測(cè)定體重并進(jìn)行所分離到的哈維氏弧菌攻毒實(shí)驗(yàn)。飼喂28天后測(cè)定試驗(yàn)蝦的體重，并分別從每個(gè)桶抽取部分試驗(yàn)蝦的血淋巴進(jìn)行血清中非特異性免疫指標(biāo)的分析，同時(shí)每個(gè)桶取30尾試驗(yàn)蝦進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，凡納濱對(duì)蝦攝食7d后各個(gè)處理間體重和抗所分離到的哈維氏弧菌的能力差異不顯著(P＞0.05)。凡納濱對(duì)蝦攝食28d后，各個(gè)處理間體重差異不顯著(P＞0.05)；各個(gè)處理間酚氧化酶活力和溶菌酶活力差異顯著(P＜0.05)，

6、超氧化物歧化酶活力差異不顯著(P＞0.05)。用所分離到的哈維氏弧菌攻毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，攝食28d后，3g/kg的1萬(wàn)分子量殼聚糖組和3g/kg的3萬(wàn)分子量殼聚糖組的14d累積死亡率(分別為43％和47％)顯著低于空白對(duì)照組(67％)(P＜0.05)。因此，飼料中添加適宜含量的殼聚糖能在一定程度上提高凡納濱對(duì)蝦抵抗本次分離到的哈維氏弧菌的能力，但是與殼聚糖的添加量和飼喂時(shí)間有關(guān)；同時(shí)殼聚糖對(duì)凡納濱對(duì)蝦體重沒(méi)有正面影響。
　　 3.

7、采用高效液相色譜法通過(guò)凡納濱對(duì)蝦（15±2g）口灌30mg/kg恩諾沙星研究在其體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)。在水溫29.5±1℃下，凡納濱對(duì)蝦口灌恩諾沙星后，血液中藥物濃度2h后到達(dá)峰值，并迅速向組織中分布，血藥經(jīng)時(shí)過(guò)程符合一級(jí)吸收二室開(kāi)放模型，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為：分布半衰期(t1/2α)，消除半衰期(t12β),0-t時(shí)間曲線(xiàn)下面積(AUC0.t),0-oo時(shí)間的曲線(xiàn)下面積(AUC0-∞)，一室到二室轉(zhuǎn)運(yùn)一級(jí)消除常數(shù)(K12).二室到一室轉(zhuǎn)運(yùn)一級(jí)消

8、除常數(shù)(K21)，總體清除率(CLs)分別為3.167h、37.277h、188.887mg/L·h、190.362mg/L·h、0.071/h、0.0211/h、0.158L/h/kg。肌肉和肝胰腺中恩諾沙星濃度與時(shí)間關(guān)系的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)采用統(tǒng)計(jì)矩原理分析，半衰期(t1/2z)分別為75.863h和207.592h，總體清除率(CLz)分別為0.655L/h/kg和0.043L/h/kg。在試驗(yàn)蝦血淋巴、肝胰腺和肌肉3種組織均能檢測(cè)到恩諾

9、沙星的代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星，主要參數(shù)：血藥峰濃度(Cmax)為0.451μg/mL、3.803μg/mL、0.038μg/mL。AUC為7.423mg/L·h、47.843mg/L·h、0.937mg/L·h,ti/2z為12.432h、24.647h、11.854h。給藥后15d時(shí)，血淋巴、肝胰腺和肌肉中恩諾沙星含量都已低于0.10μg/g，恩諾沙星及其代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星在凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)消除較慢。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，預(yù)測(cè)以30mg/kg的劑量鹽