注射病原菌、鹽度變化對凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白合成、酚氧化酶活性的影響.pdf

1、本文研究了注射病原菌、鹽度變化對凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白合成、酚氧化酶活性的影響。主要內(nèi)容包括：①凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白酚氧化酶活性的研究；②注射病原菌對凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白合成、酚氧化酶活性的影響；③鹽度變化對凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白合成、酚氧化酶活性的影響。主要研究結(jié)果如下： 1.凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白酚氧化酶活性的研究 本實(shí)驗(yàn)選擇A、B、C等7種抑制劑為材料，以凡納濱對蝦血細(xì)胞為研究對象，最終篩選出能夠有效抑制凡納濱對蝦血細(xì)胞酚氧化酶活

2、力而不抑制血藍(lán)蛋白酚氧化酶活力的抑制劑－－A并確定其適合的抑制濃度為10μM。在此基礎(chǔ)上，采用抑制劑，結(jié)合native－PAGE電泳與L－DOPA活性染色的方法，證明了凡納濱對蝦正常機(jī)體血藍(lán)蛋白(分子量450kD)表現(xiàn)出酚氧化酶活性，并且通過SDS－PAGE與L－DOPA活性染色相結(jié)合的方法，證實(shí)血藍(lán)蛋白展現(xiàn)酚氧化酶活性的單體是75 kDa亞基。 2.注射病原菌對凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白合成、酚氧化酶活性的影響 本文研究了注射

3、病原菌對凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白合成、酚氧化酶活力的影響。結(jié)果表明：注射哈維氏弧菌對凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白含量、p75和p77亞基、mRNA表達(dá)以及血淋巴、血細(xì)胞和血藍(lán)蛋白酚氧化酶活力的影響顯著(P<0.05)，而對照組無顯著變化。血藍(lán)蛋白含量和p75、p77亞基表達(dá)在0－24h內(nèi)呈峰值變化，其中血藍(lán)蛋白含量在6h內(nèi)逐漸下降、且6h時達(dá)到最低值，而p75、p77亞基表達(dá)在3h內(nèi)無明顯變化，然后均表現(xiàn)為逐漸上升趨勢，各指標(biāo)在12h時達(dá)到最大值，而且

4、亞基表達(dá)與注射哈維氏弧菌濃度呈正相關(guān)，24h后各指標(biāo)趨于穩(wěn)定，與對照組無顯著差異。在注射哈維氏弧菌短時間內(nèi)血藍(lán)蛋白mRNA表達(dá)呈迅速上升趨勢，其中注射6×106cells/mL處理組mRNA表達(dá)在6h內(nèi)呈峰值變化，3h時達(dá)到最大值，6－48h內(nèi)保持穩(wěn)定，但仍明顯高于對照組水平(P<0.05)，而注射6×105cells/mL處理組tuRNA表達(dá)量雖然增加，但只在6h達(dá)到最大值時與對照組差異顯著(P<0.05)，其余時間均與對照組差異不顯

5、著。血淋巴、血細(xì)胞和血藍(lán)蛋白注射病原菌、鹽度變化對凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白合成、酚氧化酶活性的影響酚氧化酶活力分別在12h、24h內(nèi)呈峰值變化，分別于3h、6h、3h時達(dá)到最大值、最小值和最大值，然后各指標(biāo)分別于12h、24h后恢復(fù)至對照組水平。由此說明凡納濱對蝦在病原入侵下啟動了血藍(lán)蛋白的合成，血藍(lán)蛋白mRNA表達(dá)上調(diào)，新合成的血藍(lán)蛋白主要執(zhí)行酚氧化酶等免疫功能，協(xié)同機(jī)體其它免疫因子共同參與機(jī)體的免疫防御。 3.鹽度變化對凡納濱對蝦

6、血藍(lán)蛋白合成、酚氧化酶活性的影響。 本文研究了鹽度變化(鹽度34→30，26)對凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白mRNA、p77和p75亞基表達(dá)水平及血藍(lán)蛋白酚氧化酶活性的影響。結(jié)果顯示： 鹽度變化對凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白含量、p75和p77亞基以及血藍(lán)蛋白mRNA的表達(dá)影響顯著(P<0.05)，而對照組無顯著變化。血藍(lán)蛋白含量、p75和p77亞基表達(dá)在0－48h內(nèi)呈峰值變化，各指標(biāo)在12h內(nèi)均表現(xiàn)為逐漸上升趨勢、12h時達(dá)到最大值，并且

7、與鹽度變化呈明顯的正相關(guān)性；之后逐漸下降，血藍(lán)蛋白含量、p75和p77亞基表達(dá)分別于24h、24h和48h趨于穩(wěn)定，與對照組無顯著差異。在鹽度變化12h內(nèi)血藍(lán)蛋白mRNA表達(dá)呈迅速上調(diào)趨勢，12h時達(dá)到最大值，48－72h內(nèi)穩(wěn)定于對照組水平(P>0.05)。 鹽度變化對凡納濱對蝦血淋巴、血細(xì)胞和血藍(lán)蛋白酚氧化酶活力影響顯著(P<0.05)，而對照組無顯著變化。各指標(biāo)在48h內(nèi)呈峰值變化，分別于12h時達(dá)到最大值或最小值，且與鹽度