低溫脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦呼吸性能及抗氧化能力的影響.pdf

1、凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）因具備生長(zhǎng)速度快、產(chǎn)肉率高、肉質(zhì)美味及耐鹽度廣等特點(diǎn)而被普遍養(yǎng)殖，其養(yǎng)殖業(yè)已成為我國(guó)水產(chǎn)行業(yè)不可缺少的支柱型產(chǎn)業(yè)。然而在養(yǎng)殖過程中，低溫及寒潮等天氣容易引發(fā)凡納濱對(duì)蝦的大規(guī)模死亡，嚴(yán)重影響了凡納濱對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。為了探討低溫對(duì)凡納濱對(duì)蝦呼吸性能及抗氧化能力的影響，本研究克隆了凡納濱對(duì)蝦的胞紅蛋白(cytoglobin，Cygb)及腦紅蛋白（neuroglobin，Ngb）基因序

2、列，分析了低溫脅迫下Cygb、Ngb及血藍(lán)蛋白的變化，測(cè)定了呼吸代謝及抗氧化相關(guān)酶活性，同時(shí)觀察了低溫脅迫后鰓組織結(jié)構(gòu)變化。主要研究結(jié)果如下:
　　1)低溫脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓組織結(jié)構(gòu)的影響
　　凡納濱對(duì)蝦經(jīng)不同溫度處理后取鰓組織，通過組織切片HE染色觀察發(fā)現(xiàn)25℃水溫中凡納濱對(duì)蝦鰓絲排列整齊、結(jié)構(gòu)清晰，上皮細(xì)胞及角質(zhì)層結(jié)構(gòu)正常，微血腔中血細(xì)胞清晰可見。20℃水溫中鰓絲腫脹、排列紊亂，且大部分血細(xì)胞核腫大。此外隨著水溫由20℃

3、降至10℃過程中，鰓組織結(jié)構(gòu)損傷加重，角質(zhì)層及上皮細(xì)胞出現(xiàn)壞死脫落，血細(xì)胞出現(xiàn)破裂。
　　2)低溫脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦血藍(lán)蛋白含量、呼吸代謝及抗氧化酶活性的影響
　　凡納濱對(duì)蝦血藍(lán)蛋白含量測(cè)定結(jié)果顯示，溫度下降會(huì)導(dǎo)致血藍(lán)蛋白含量降低。溫度下降凡納濱對(duì)蝦鰓、肌肉及肝胰腺組織中琥珀酸脫氫酶(Succinicdehydrogenase，SDH)活性降低，且在溫度下降到10℃時(shí)SDH活性最低;而乳酸脫氫酶(Lactate dehydro

4、genase，LDH)活性則在鰓、肌肉及肝胰腺組織中隨溫度下降呈升高趨勢(shì)?？寡趸富钚越Y(jié)果顯示在肌肉及鰓中總抗氧化能力(Totalantioxidant capacity, T-AOC)含量隨溫度的下降先升高后降低，并在15℃時(shí)達(dá)到最大;但肝胰腺中T-AOC的含量則隨溫度的降低而呈下降的趨勢(shì)。過氧化氫酶（Catalase，CAT）的活性在上述三個(gè)組織中隨溫度的下降呈上升趨勢(shì)，并在溫度降至10℃時(shí)活性最高。丙二醛(Malondialdeh

5、yde，MDA)在鰓和肌肉中的變化趨勢(shì)類似，即隨著溫度的下降MDA的含量先上升后降低，并分別在20℃和15℃時(shí)達(dá)到最大;但肝胰腺中MDA含量則先降低后升高。
　　3)凡納濱對(duì)蝦Cygb和Ngb基因的克隆及序列分析
　　基于生物信息學(xué)及多重PCR的方法獲得了凡納濱對(duì)蝦Cygb和Ngb基因的cDNA序列，其中Cygb基因的cDNA全長(zhǎng)1059 bp，包括573 bp的ORF，編碼190個(gè)氨基酸，173 bp的5'UTR以及313

6、 bp的3'UTR。Ngb基因的cDNA序列1085 bp，包括567 bp的3'UTR以及528 bp的部分ORF。SMART結(jié)構(gòu)域分析顯示凡納濱對(duì)蝦Cygb和Ngb屬于攜氧球蛋白家族，具有典型的globin結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析結(jié)果顯示，與Ngb相比，Cygb與Mb的親緣關(guān)系更近。
　　4)低溫脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦Cygb和Ngb基因表達(dá)的影響
　　熒光定量PCR結(jié)果顯示，Cygb和Ngb基因在凡納濱對(duì)蝦不同組織中均有表達(dá)。