毒死蜱對(duì)凡納濱對(duì)蝦的毒性效應(yīng)研究.pdf

1、為了對(duì)毒死蜱的毒性做出安全性評(píng)價(jià),本文以凡納濱對(duì)蝦為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,研究了毒死蜱對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦(4.88±0.11g)和成蝦(10.27±0.41g)的急性毒性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,毒死蜱濃度越高,死亡時(shí)間出現(xiàn)越早;毒死蜱對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦的24hLC50、48hLC50、72hLC50和96hLC50分別為3.948μg/L、2.695μg/L、1.320μg/L和0.758μg/L,安全濃度為0.0758μg/L;毒死蜱對(duì)凡納濱對(duì)蝦成蝦的24h

2、LC50、48h LC50、72hLC50和96hLC50分別為5.743μg/L、3.688μg/L、2.437μg/L和1.951μg/L,安全濃度為0.195μg/L。按照農(nóng)藥毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),毒死蜱對(duì)凡納濱對(duì)蝦屬劇毒性農(nóng)藥。另外,和幼蝦相比,成蝦對(duì)毒死蜱的敏感性較低。
　　為進(jìn)一步評(píng)價(jià)養(yǎng)殖水環(huán)境中毒死蜱對(duì)凡納濱對(duì)蝦生存的危害性,本研究開(kāi)展了毒死蜱脅迫下白斑綜合征病毒(WSSV)對(duì)凡納濱對(duì)蝦致死實(shí)驗(yàn),分析了毒死蜱脅迫下WSSV在

3、凡納濱對(duì)蝦鰓組織增殖規(guī)律和肌肉組織乙酰膽堿酯酶活性變化情況。在上述急性毒性實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,確定了毒死蜱脅迫實(shí)驗(yàn)濃度為0.2μg/L,此濃度下藥浴4 d后對(duì)凡納濱對(duì)蝦注射WSSV,結(jié)果顯示:毒死蜱脅迫下注射WSSV組的對(duì)蝦死亡率(83.33％±4.7%)極顯著高于乙醇-WSSV組(40%±0.9%);熒光定量PCR檢測(cè)對(duì)蝦鰓組織WSSV含量顯示:感染72h后,毒死蜱-WSSV組WSSV含量約是乙醇-WSSV組的4倍;感染96h后,毒死蜱-W

4、SSV組WSSV含量顯著增加,約是72h毒死蜱-WSSV組的4.9倍,是96h乙醇-WSSV對(duì)照組的5.9倍。毒死蜱脅迫下,對(duì)蝦肌肉組織乙酰膽堿酯酶(AChE)活性低于對(duì)照組20%左右。由此可見(jiàn),毒死蜱脅迫下,WSSV增殖速率加快,導(dǎo)致對(duì)蝦死亡率升高。
　　為進(jìn)一步探究毒死蜱對(duì)凡納濱對(duì)蝦的毒理學(xué)機(jī)制,本研究從免疫學(xué)的角度,檢測(cè)了亞致死劑量毒死蜱短期內(nèi)對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫相關(guān)基因表達(dá)變化的影響。首先在上述急性毒性實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)選擇

5、了毒死蜱藥浴濃度為1/296hLC50(0.38μg/L),分析了對(duì)蝦鰓和肌肉AChE活性的變化,然后通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)了毒死蜱藥浴4天對(duì)蝦鰓組織中酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、溶菌酶(LyZ)和對(duì)蝦素(Penaeidin-3a)基因隨時(shí)間的表達(dá)變化。結(jié)果顯示:0.38μg/L毒死蜱藥浴4天期間,對(duì)蝦沒(méi)有出現(xiàn)狂游,身體抽搐等有機(jī)磷中毒的典型癥狀,沒(méi)有出現(xiàn)對(duì)蝦死亡。同時(shí)毒死蜱藥浴24h、48h、72

6、h、96h后,和對(duì)照組相比,除了鰓組織96h AChE活性被抑制15%左右,其他各時(shí)間點(diǎn)對(duì)蝦鰓和肌肉乙酰膽堿酯酶活性均沒(méi)有出現(xiàn)顯著性差異;熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:受毒死蜱影響,對(duì)蝦PO mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào),除0h外,其他四個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別是對(duì)照組PO表達(dá)水平的1.38倍,1.54倍,1.95倍和1.40倍;對(duì)蝦SOD表達(dá)量開(kāi)始上升,至48h達(dá)到最大,約是對(duì)照組SOD表達(dá)量的2.5倍,之后逐漸下降到正常水平;對(duì)蝦LyZ mRNA表達(dá)

7、量從24h到72h逐漸上升,72h達(dá)到最大值,約是對(duì)照組的2.24倍,之后下降;對(duì)蝦Penaeidin-3a的表達(dá)水平48h達(dá)到最高,約是對(duì)照組的2.14倍,之后逐漸下降接近正常水平;毒死蜱藥浴24h后CAT表達(dá)水平與對(duì)照組CAT水平基本一致,48h到72h,CAT表達(dá)水平逐漸上升,至72h表達(dá)水平約是對(duì)照組的1.66倍,96h表達(dá)水平出現(xiàn)下降。
　　綜上所述,毒死蜱對(duì)凡納濱對(duì)蝦屬于劇毒農(nóng)藥。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下,毒死蜱對(duì)幼蝦的毒性