生姜莖基腐病病原菌的鑒定與防治.pdf

1、生姜莖基腐病是典型的土傳病害和種子傳播病害，目前對(duì)生姜莖基腐病的防治主要基于化學(xué)農(nóng)藥和肥料，開(kāi)發(fā)替代型的環(huán)境友好型藥劑勢(shì)在必行。山東省生姜栽培由來(lái)已久，近年來(lái)隨著生姜種植面積的不斷擴(kuò)大，生姜病害的發(fā)生也呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，尤其是生姜莖基腐病的發(fā)生尤為嚴(yán)重，給姜農(nóng)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失，目前已成為生姜生產(chǎn)中的主要問(wèn)題之一。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)采集病樣，在形態(tài)學(xué)觀察、致病性測(cè)定及序列分析的基礎(chǔ)上，對(duì)生姜莖基腐病病原菌進(jìn)行研究。通過(guò)室內(nèi)藥劑篩選和田間生物防治實(shí)驗(yàn)

2、，以期為生姜莖基腐病的防治提供可靠的理論依據(jù)。
　　本實(shí)驗(yàn)主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　1、從山東省安丘生姜種植基地的不同發(fā)病地區(qū)，采集生姜莖基腐病病株60余株。分離純化后，得到的病原菌腐霉菌株通過(guò)致病性測(cè)定符合Koch法則。通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察和rDNA-ITS序列分析得到三種不同的病原菌腐霉，分別是刺腐霉（Pythium spinosum）、群結(jié)腐霉（P. myriotylum）、林棲腐霉（P. sylvaticum）。
　　

3、2、采用菌絲生長(zhǎng)速率法和活體組織法測(cè)定了甲殼胺對(duì)P. myriotylum、P. spinosum、P. sylvaticum的抑制作用，結(jié)果得到甲殼胺對(duì)3種腐霉均有抑制作用，抑制中濃度（EC50）分別為422.7112 mg/L、401.6995 mg/L、446.9107 mg/L?；铙w組織實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甲殼胺可有效抑制生姜莖基腐病的生長(zhǎng)。
　　3、采用顯微觀察照相技術(shù)觀察甲殼胺處理后的腐霉菌絲形態(tài)的變化。觀察顯示甲殼胺處理后

4、的菌絲膨大、扭曲，分枝增多，菌絲內(nèi)部出現(xiàn)空泡化。
　　4、采用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)比較用甲殼胺處理的群結(jié)腐霉病原菌菌和對(duì)照組的表達(dá)差異。對(duì)差異表達(dá)的基因進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果共獲得了770個(gè)差異表達(dá)基因，其中有237個(gè)上調(diào)基因，533個(gè)下調(diào)基因。將差異表達(dá)基因與GO數(shù)據(jù)庫(kù)和KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)注釋，經(jīng)功能富集后發(fā)現(xiàn)，一些涉及跨膜運(yùn)輸有關(guān)的基因以及一些與跨膜運(yùn)輸有關(guān)的酶的活動(dòng)發(fā)生改變。
　　5、采用常規(guī)土樣分離法對(duì)生姜不同發(fā)病地中的

5、腐霉含量進(jìn)行了測(cè)定。對(duì)安丘和昌邑發(fā)生生姜莖基腐病不同程度的地塊進(jìn)行土壤含菌量測(cè)定。測(cè)定結(jié)果是不發(fā)病地塊每克土壤含菌量1-100個(gè)，重病地塊每克土壤含菌量800-2500個(gè)。結(jié)果表明腐霉含菌量越高，生姜莖基腐病發(fā)病越重。
　　6、本研究采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了10種植物精油對(duì)腐霉的抑菌活性，從中篩選出4種具有廣譜抗菌活性的植物精油，分別是月桂精油、肉桂精油、天竺葵精油和丁香酚精油。丁香酚對(duì)供試腐霉表現(xiàn)出較高的生物活性，精油濃度在50