板藍(lán)根根腐病病原菌鑒定及抑菌中草藥提取物的篩選.pdf

1、近年來(lái)，板藍(lán)根根腐病在一些產(chǎn)區(qū)發(fā)生逐年加重，成為板藍(lán)根生產(chǎn)的限制因素之一。本文以板藍(lán)根根腐病為研究對(duì)象，進(jìn)行了病原菌的分離、致病性測(cè)定、種類鑒定、生物學(xué)特性研究以及抑菌中草藥提取物的篩選試驗(yàn)。 分別于2005年7月和2006年7月，從河北省唐山地區(qū)共采集108個(gè)板藍(lán)根根腐病樣品，分離獲得172株分離物。按照柯赫氏法則，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定分別屬于2屬3個(gè)種：茄腐鐮刀菌(Fusarium solani)、尖孢鐮刀菌(Fusarium ox

2、ysporum)和禾谷絲核菌(Rhizoctonia cer4ealis)。三者的分離頻率依次為48.8％，44.2％和7％。 為了進(jìn)一步確定病原菌的分類地位，本研究對(duì)菌株P(guān)1、P2、P4和P5進(jìn)行了ITS序列分析。結(jié)果表明：菌株P(guān)1與GenBank中尖孢鐮刀菌(DQ459007)的同源性為100％，P2與禾谷絲核菌(AJ242887)同源性為100％，P4與茄腐鐮刀菌(AY310442)的同源性為99％，P5與茄腐鐮刀菌(AJ

3、608989)的同源性為100％。 對(duì)P1、P2、P4和P5供試4個(gè)菌株在不同溫度、pH值、碳源、氮源、相對(duì)濕度條件下的菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)以及致死溫度研究的結(jié)果表明，菌株P(guān)1在PDA培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢量和孢子萌發(fā)最適溫度均為25℃，菌落生長(zhǎng)和分生孢子萌發(fā)最適pH值均為6，產(chǎn)孢最適pH值為5，最適碳源為蔗糖，最適氮源為硝酸鈉，在相對(duì)濕度低于90％時(shí)孢子不萌發(fā)，分生孢子致死溫度為55℃。菌株P(guān)2在PDA培養(yǎng)基上最適生長(zhǎng)溫

4、度為30℃，在pH值為6時(shí)生長(zhǎng)速度最快，最適碳源為淀粉，最適氮源為硝酸鈉。菌株P(guān)4、P5在PDA培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)和產(chǎn)孢最適溫度均為30℃，孢子萌發(fā)最適溫度為25℃，菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢和分生孢子萌發(fā)最適pH值均為7，最適碳源為乳糖，最適氮源為硝酸鈉，相對(duì)濕度低于90％孢子不萌發(fā)，分生孢子致死溫度為50℃。 以菌株P(guān)4為靶標(biāo)菌，測(cè)試了123種中草藥提取物對(duì)菌落生長(zhǎng)及分生孢子萌發(fā)的抑制作用。結(jié)果表明，提取物濃度為10 mg/mL時(shí)，有99

5、種提取物對(duì)菌落生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用，其中TS-10、TS-42和TS-84的抑制率均大于50％，而且TS-10的抑制率達(dá)到了100％；有112種提取物對(duì)分生孢子萌發(fā)具有顯著的抑制作用，其中10種提取物的抑制率在50％以上，而且TS-10和TS-11的抑制率達(dá)到100％。將抑制率大于50％的10種提取物稀釋為5 mg/mL，進(jìn)行二次篩選，發(fā)現(xiàn)TS-42和TS-84兩種提取物對(duì)菌落生長(zhǎng)的抑制作用下降，而TS-10對(duì)菌落生長(zhǎng)抑制率仍為100